[發(fā)明專利]高噪聲樣品中原位檢測核苷酸變體及相關(guān)的組合物和方法

有效

• 申請?zhí)枺?/td>: 201680072719.3
• 申請日: 2016-10-11
• 公開（公告）號: CN108368543B
• 公開（公告）日: 2023-06-13
• 發(fā)明（設(shè)計）人: 羅宇齡;吳興永;潘柳柳;王小明;馬小駿;蘇楠;史蒂夫·陳
• 申請（專利權(quán)）人: 領(lǐng)先細胞醫(yī)療診斷有限公司
• 主分類號: C12Q1/682
• 分類號: C12Q1/682;C12Q1/6841;C12Q1/6827
• 代理公司: 北京市柳沈律師事務(wù)所 11105
• 代理人: 鄒宗亮

1.一種原位檢測固定和透性化細胞的樣品中目標核酸的單核苷酸變異的方法，包括：

（A）使所述樣品與單核苷酸變異探針和鄰近探針（NP）接觸，其中所述單核苷酸變異探針包含能夠與包含所述單核苷酸變異的目標核酸區(qū)域特異性雜交的目標錨定片段（SPAT）和前級放大子錨定片段（SPAP），以及其中所述NP包含能夠與鄰近所述單核苷酸變異探針的結(jié)合位點的目標核酸區(qū)域雜交的目標錨定片段（NPAT）和NP前級放大子錨定片段（NPAP）；

（B）使所述樣品與單核苷酸變異探針前級放大子（SPM）和NP前級放大子（NPM）接觸，其中所述SPM包含能夠與所述單核苷酸變異探針雜交的片段并包含兩個或更多個單核苷酸變異探針協(xié)作錨（SPCA），和其中所述NPM包含能夠與所述NP雜交的片段并包含兩個或更多個NP協(xié)作錨（NPCA）；

（C）?使所述樣品與協(xié)作放大子（COM）接觸，其中所述COM包含與所述SPCA互補的第一片段、與所述NPCA互補的第二片段、和包含多個標簽放大子錨定片段的第三片段；

（D）使所述樣品與標簽探針系統(tǒng)（LPS）接觸，其中所述LPS包含多個標簽放大子（LM）和多個標簽探針（LP），其中每個LM包含能夠與所述COM的標簽放大子錨定片段雜交的片段以及多個標簽探針錨定片段，其中每個LP包含可檢測標簽和與LM的所述標簽探針錨定片段雜交的片段，其中上述雜交形成信號發(fā)生復合物（SGC），其包含具有所述單核苷酸變異的目標核酸、單核苷酸變異探針、NP、SPM、NPM、多個COM、多個LM和多個LP；和

（E）原位檢測所述樣品上來自所述SGC的信號，

其中所述SPAT的長度是10到20個核苷酸，所述SPCA的長度是10到20個核苷酸，所述NPCA的長度是10到20個核苷酸。

2.權(quán)利要求1的方法，其中所述目標核酸是RNA。

3.權(quán)利要求1或2的方法，其中所述固定和透性化細胞是在組織玻片上的。

4.權(quán)利要求1-3的任一項的方法，其中所述SPAP的長度是14到28個核苷酸。

5.權(quán)利要求1-4的任一項的方法，其中所述單核苷酸變異探針任選地包含所述SPAT和所述SPAP之間的間隔區(qū)，其中所述間隔區(qū)的長度是1到10個核苷酸。

6.權(quán)利要求1-5的任一項的方法，其中所述NPAT的長度是16到30個核苷酸。

7.權(quán)利要求1-6的任一項的方法，其中所述NPAP的長度是14到28個核苷酸。

8.權(quán)利要求1-7的任一項的方法，其中所述NP任選地包含所述NPAT和所述NPAP之間的間隔區(qū)，其中所述間隔區(qū)的長度是1到10個核苷酸。

9.權(quán)利要求1-8的任一項的方法，其中所述SPM的長度是50到500個核苷酸。

10.權(quán)利要求1-9的任一項的方法，其中所述NPM的長度是50到500個核苷酸。

11.權(quán)利要求1-10的任一項的方法，其中所述SPM任選地包含兩個或更多個SPCA之間的間隔區(qū)，其中所述SPCA之間的間隔區(qū)的長度獨立地是1到10個核苷酸。

12.權(quán)利要求1-11的任一項的方法，其中所述NPM任選地包含兩個或更多個NPCA之間的間隔區(qū)，其中所述NPCA之間的間隔區(qū)的長度獨立地是1到10個核苷酸。

13.權(quán)利要求1-12的任一項的方法，其中所述COM的長度是60到900個核苷酸。

14.權(quán)利要求1-13的任一項的方法，其中所述COM任選地包含所述第一、第二和/或第三片段之間的間隔區(qū)，其中所述第一、第二和/或第三片段之間的間隔區(qū)的長度獨立地是1到10個核苷酸。