[發明專利]新穎的RNA導向性核酸酶及其用途

有效

• 申請號: 201680072288.0
• 申請日: 2016-10-07
• 公開（公告）號: CN108513579B
• 公開（公告）日: 2022-10-04
• 發明（設計）人: J·M·奇拓爾;E·D·納吉;K·H·特納
• 申請（專利權）人: 孟山都技術公司
• 主分類號: C12N5/00
• 分類號: C12N5/00;C12N5/04;C12N9/22;C12N15/05;C12N15/00;C12N15/63;C12N15/74;C12N15/82;C12N15/90;C12N15/113;C12P19/34
• 代理公司: 北京市金杜律師事務所 11256
• 代理人: 孟凡宏;王月

1.一種重組核酸，其包含可操作地連接至編碼CRISPR酶的多核苷酸的異源植物啟動子，所述CRISPR酶由SEQ ID NO:73的氨基酸序列組成。

2.如權利要求1所述的重組核酸，其中所述CRISPR酶由SEQ ID NO:74的核苷酸序列編碼。

3.如權利要求1所述的重組核酸，其還包含至少一個編碼能夠與靶序列雜交的向導RNA的多核苷酸，其中所述向導RNA與所述CRISPR酶形成復合物。

4.如權利要求3所述的重組核酸，其中所述至少一個編碼向導RNA的多核苷酸被可操作地連接至第二植物啟動子。

5.如權利要求1所述的重組核酸，其還包含至少一個編碼供體多核苷酸的多核苷酸。

6.如權利要求5所述的重組核酸，其中所述至少一個編碼供體多核苷酸的多核苷酸被可操作地連接至第二植物啟動子。

7.如權利要求1所述的重組核酸，其中編碼所述CRISPR酶的所述多核苷酸還編碼至少一個核定位信號(NLS)。

8.一種載體，其包含如權利要求1至7中任一項所述的重組核酸。

9.一種用于對靶核酸序列進行序列特異性修飾的非天然存在的系統，其包含(a)一個或多個向導RNA或者編碼所述一個或多個向導RNA的DNA分子，其中所述一個或多個向導RNA能夠與所述靶核酸序列雜交；和(b)由SEQ ID NO:73的氨基酸序列組成的CRISPR酶或者編碼所述CRISPR酶的多核苷酸，其中所述一個或多個向導RNA和所述CRISPR酶在天然情況下不共同存在。

10.如權利要求9所述的系統，其中編碼所述CRISPR酶的所述多核苷酸由SEQ ID NO:74的核苷酸序列組成。

11.如權利要求9所述的系統，其中所述一個或多個向導RNA包含連接至正向重復序列的向導序列。

12.如權利要求9-11中任一項所述的系統，其中所述系統是反式激活cr(tracr)序列。

13.如權利要求9-11中任一項所述的系統，其中所述向導RNA是由向導序列和tracr序列構成的嵌合RNA。

14.如權利要求9-11中任一項所述的系統，其中所述靶核酸序列包含編碼核酸序列、非編碼核酸序列或者編碼核酸序列與非編碼核酸序列的組合。

15.如權利要求9-11中任一項所述的系統，其中所述靶核酸序列包含內源基因或轉基因。

16.如權利要求9-11中任一項所述的系統，其中所述系統包含二階陽離子。

17.如權利要求9-11中任一項所述的系統，其中(a)所述向導RNA或編碼所述向導RNA的DNA分子被提供在第一核酸分子上，并且編碼所述CRISPR酶的所述多核苷酸被提供在第二核酸分子上；或者(b)所述向導RNA或編碼向導RNA的DNA分子和編碼所述CRISPR酶的所述多核苷酸被提供在單個核酸分子上。

18.如權利要求9所述的系統，其中所述向導RNA呈分離的RNA的形式，或者在載體中被編碼，并且其中所述載體是病毒載體、質粒載體或農桿菌載體。

19.如權利要求9-11或18中任一項所述的系統，其還包含供體多核苷酸。