[發(fā)明專利]用于生長或檢測微生物的化學(xué)成分確定的培養(yǎng)基

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• 申請(qǐng)?zhí)枺?/td>: 201680070565.4
• 申請(qǐng)日: 2016-11-08
• 公開（公告）號(hào): CN108603163A
• 公開（公告）日: 2018-09-28
• 發(fā)明（設(shè)計(jì)）人: R.肖萊;A.吉爾曼;D.利弗雷;M-C.萊特
• 申請(qǐng)（專利權(quán)）人: 默克專利股份公司;斯特拉斯堡大學(xué);法國國家科學(xué)研究中心
• 主分類號(hào): C12N1/20
• 分類號(hào): C12N1/20;C12N1/14;C12N1/16;C12N1/38;C12Q1/04;C12Q1/22
• 代理公司: 中國專利代理(香港)有限公司 72001
• 代理人: 李連濤;羅文鋒

本發(fā)明涉及用于檢測范圍廣泛的微生物的化學(xué)成分確定的培養(yǎng)基，其包含至少一種滲透保護(hù)劑化合物和至少一種脂肪酸。

本發(fā)明涉及用于檢測范圍廣泛的微生物的包含至少一種滲透保護(hù)劑化合物和至少一種脂肪酸的化學(xué)成分確定的培養(yǎng)基（chemically defined culture medium）。

自十九世紀(jì)以來，稱為復(fù)合培養(yǎng)基的通用培養(yǎng)基已可用于生長和培養(yǎng)細(xì)菌、酵母和霉菌。自此以來，制造這些培養(yǎng)基的方法和所用的主要組分在其基本性質(zhì)方面出乎意料地幾無改變。這些微生物培養(yǎng)基的主要基礎(chǔ)是它們所含有的蛋白胨。

存在的蛋白胨被設(shè)計(jì)為以允許多種多樣的細(xì)菌、酵母和霉菌生長的組合和濃度存在。由此，這些蛋白胨的混合物是在生物化學(xué)方面豐富且均衡的營養(yǎng)物來源，并通常通過添加鹽、緩沖劑和優(yōu)化快速生長所必需的其它原材料來補(bǔ)充。此外，該培養(yǎng)基的固體形式通常易溶于水。在溶解后，該培養(yǎng)基是可滅菌的，并可以在適當(dāng)方便的容器中提供以防止污染，但同時(shí)在用原核和/或真核細(xì)胞接種后允許在氧氣中（如果需要的話）。隨后，含有培養(yǎng)基和細(xì)胞的容器在適當(dāng)溫度下孵育以允許細(xì)胞生長。

但是，僅由熟悉本領(lǐng)域的經(jīng)驗(yàn)豐富的人員慎重選擇蛋白胨類型才能產(chǎn)生具有在其生物化學(xué)組成方面足夠?qū)捛易銐蚱胶獾臓I養(yǎng)基礎(chǔ)的適當(dāng)培養(yǎng)基，以便能夠培養(yǎng)非常寬范圍的原核生物以及真核生物。蛋白胨品質(zhì)因蛋白胨類型而異，在相同蛋白胨的不同制造商之間不同，在相同制造商的不同等級(jí)之間不同，甚至在來自一個(gè)制造商的相同等級(jí)的不同批次之間也顯著不同。但是，對(duì)這種變化的品質(zhì)的生物化學(xué)性質(zhì)知之甚少，尤其是在批次之間的變化水平上。但是，生物化學(xué)變化當(dāng)然一部分是由于所用天然原材料的品質(zhì)變化。因此，由于此類原材料中的營養(yǎng)缺乏或營養(yǎng)不平衡，并非所有批次的蛋白胨都適用于特定的培養(yǎng)基配方，因此各批次必須小心地選擇以便能夠生長多種原核生物和真核生物，即支持多種細(xì)菌、酵母和霉菌的可接受的生長。

蛋白胨的確切組成是未知的。這意味著對(duì)此類天然原材料提供的促進(jìn)細(xì)胞生長的關(guān)鍵營養(yǎng)因素有所了解但不充分。例如，知之甚少和同樣難以控制是培養(yǎng)基中此類原材料的負(fù)面物理-化學(xué)相互作用，這導(dǎo)致其沉淀。除了通常存在于傳統(tǒng)培養(yǎng)基中的鹽、緩沖劑和其它組分之外，當(dāng)一種蛋白胨與其它蛋白胨類型混合時(shí)，問題的復(fù)雜性提高。制造均衡的通用生長培養(yǎng)基是試驗(yàn)、錯(cuò)誤和長期經(jīng)驗(yàn)的問題。添加的個(gè)別蛋白胨的批次間變化必須充分控制，以使得不適于產(chǎn)生測試原核（細(xì)菌）和真核（酵母和真菌）菌株的全范圍期望細(xì)胞生長的批次——無論單獨(dú)還是與其它蛋白胨類型組合——可以從制造此類培養(yǎng)基的生產(chǎn)過程中消除。

即使在這些措施之后，用于生長范圍非常廣泛的細(xì)胞株的此類通用培養(yǎng)基不一定具有充分的生物化學(xué)平衡或營養(yǎng)以生長在通常用于證實(shí)培養(yǎng)基適于環(huán)境監(jiān)控應(yīng)用的寬幅試驗(yàn)板中測試的所有細(xì)菌、酵母和真菌菌株。一方面，某些細(xì)胞類型對(duì)該培養(yǎng)基中提供的生物化學(xué)物質(zhì)的正確平衡非常敏感。另一方面和此外，特別是非常苛刻的細(xì)胞需要額外的補(bǔ)充劑，如新鮮的血液或血液提取物來提高它們的生長性能。即使這些培養(yǎng)基對(duì)于某些非常苛刻的細(xì)胞類型不具有足夠的營養(yǎng)組成，需要進(jìn)一步添加補(bǔ)充劑（一種或多種）來支持生長或加速生長以使其有效用于通常在環(huán)境樣品中發(fā)現(xiàn)的多種多樣的原核和真核細(xì)胞。

最近開發(fā)了化學(xué)成分確定的細(xì)胞培養(yǎng)基。但是，迄今為止，用于微生物培養(yǎng)的化學(xué)成分確定的培養(yǎng)基的生產(chǎn)商集中于支持原核生物（例如細(xì)菌）或真核生物（例如酵母或真菌或昆蟲或哺乳動(dòng)物細(xì)胞）的生長。

WO 2007/135385例如公開了用于生長細(xì)菌，尤其是奈瑟氏菌屬的化學(xué)成分確定的培養(yǎng)基。

GB 2464203公開了用于計(jì)數(shù)彎曲菌屬的化學(xué)成分確定的培養(yǎng)基。

本發(fā)明的目的由此是提供基于化學(xué)成分確定的原材料的細(xì)胞培養(yǎng)基，其提供了生長可以與例如公知的蛋白胨和/或基于提取物的培養(yǎng)基相比的范圍非常廣泛的微生物（如原核生物以及真核生物物種）的基礎(chǔ)，覆蓋生長通常在各種樣品（如環(huán)境樣品、來自食品和飲料行業(yè)的樣品、藥物樣品或臨床樣品）中發(fā)現(xiàn)的原核和真核細(xì)胞的需要。