[發明專利]用于治療1A型糖原貯積病的材料和方法

在審

• 申請號: 201680064861.3
• 申請日: 2016-11-07
• 公開（公告）號: CN109328231A
• 公開（公告）日: 2019-02-12
• 發明（設計）人: C·A·科萬;R·L·博戈拉;A·S·隆貝里;K·L·博里
• 申請（專利權）人: 克里斯普治療股份公司
• 主分類號: C12N9/16
• 分類號: C12N9/16;C12N15/10
• 代理公司: 中國專利代理(香港)有限公司 72001
• 代理人: 梁謀;羅文鋒

1.一種通過基因組編輯來編輯人細胞中的葡萄糖-6-磷酸酶催化性(G6PC)基因的方法，所述方法包括下述步驟：在所述人細胞中引入一種或多種脫氧核糖核酸(DNA)內切核酸酶以實現在G6PC基因或編碼G6PC基因的調節元件的其它DNA序列內或附近的一個或多個單鏈斷裂(SSB)或雙鏈斷裂(DSB)，其導致一個或多個外顯子在G6PC基因內或附近的永久插入、所述外顯子的表達或功能的校正或調節，或影響G6PC基因的表達或功能，并導致葡萄糖-6-磷酸酶(G6Pase)蛋白活性的恢復。

2.一種通過基因組編輯將G6PC基因插入人細胞中的方法，所述方法包括：在所述人細胞中引入一種或多種脫氧核糖核酸(DNA)內切核酸酶以實現在安全港基因座內或附近的一個或多個單鏈斷裂(SSB)或雙鏈斷裂(DSB)，其導致G6PC基因的永久插入和G6Pase蛋白活性的恢復。

3.一種用于治療具有1a型糖原貯積病(GSD1a)的患者的離體方法，所述方法包括下述步驟：

i)制備患者特異性的誘導性多能干細胞(iPSC)，或在iPSC的安全港基因座內或附近編輯；

ii)在所述iPSC的葡萄糖-6-磷酸酶催化性(G6PC)基因或編碼G6PC基因的調節元件的其它DNA序列內或附近編輯；

iii)使編輯過基因組的iPSC分化成肝細胞；和

iv)將所述肝細胞移植進所述患者中。

4.根據權利要求3所述的方法，其中所述制備步驟包括：

a)從所述患者分離體細胞；和

b)將一組多能性相關基因引入所述體細胞中以誘導所述體細胞變成多能干細胞。

5.根據權利要求4所述的方法，其中所述體細胞是成纖維細胞。

6.根據權利要求4所述的方法，其中所述組的多能性相關基因是一種或多種選自以下的基因：OCT4、SOX2、KLF4、Lin28、NANOG和cMYC。

7.根據權利要求3-6中的任一項所述的方法，其中所述編輯步驟包括：在所述iPSC中引入一種或多種脫氧核糖核酸(DNA)內切核酸酶以實現在G6PC基因或編碼G6PC基因的調節元件的其它DNA序列內或附近的一個或多個單鏈斷裂(SSB)或雙鏈斷裂(DSB)，其導致一個或多個外顯子在G6PC基因內或附近的永久插入、所述外顯子的表達或功能的校正或調節，或影響G6PC基因的表達或功能，或一個或多個外顯子在安全港基因座內或附近的永久插入、所述外顯子的表達或功能的校正或調節，并導致葡萄糖-6-磷酸酶(G6Pase)蛋白活性的恢復。

8.根據權利要求7所述的方法，其中所述安全港基因座選自AAVS1(PPP1R12C)、ALB、Angptl3、ApoC3、ASGR2、CCR5、FIX(F9)、Gys2、HGD、Lp(a)、Pcsk9、Serpina1、TF和TTR。

9.根據權利要求3-8中的任一項所述的方法，其中所述分化步驟包括以下一個或多個以使編輯過基因組的iPSC分化成肝細胞：使所述編輯過基因組的iPSC與激活素、B27補體、FGF4、HGF、BMP2、BMP4、制癌蛋白M、地塞米松(Dexametason)中的一種或多種接觸。

10.根據權利要求3-9中的任一項所述的方法，其中所述移植步驟包括，通過移植、局部注射或全身輸注或它們的組合將所述肝細胞移植進所述患者中。