[發(fā)明專利]用于制備視網(wǎng)膜色素上皮細(xì)胞的方法

在審

• 申請?zhí)枺?/td>: 201680064595.4
• 申請日: 2016-09-08
• 公開（公告）號: CN108350421A
• 公開（公告）日: 2018-07-31
• 發(fā)明（設(shè)計）人: 安藤覺;黑田貴雄
• 申請（專利權(quán)）人: 大日本住友制藥株式會社;希里歐斯株式會社
• 主分類號: C12N5/071
• 分類號: C12N5/071;A61K35/30;A61L27/00;A61P27/02;C12Q1/02
• 代理公司: 中科專利商標(biāo)代理有限責(zé)任公司 11021
• 代理人: 單驍越

1.視網(wǎng)膜色素上皮細(xì)胞的制備方法，所述制備方法包括以下步驟：

(1)第一步，在包含F(xiàn)GF受體抑制劑和/或MEK抑制劑的培養(yǎng)基中培養(yǎng)多能干細(xì)胞達(dá)不多于30天的時間，和

(2)第二步，在Nodal信號轉(zhuǎn)導(dǎo)通路抑制劑和/或Wnt信號轉(zhuǎn)導(dǎo)通路抑制劑的存在下培養(yǎng)在所述第一步中得到的細(xì)胞以形成視網(wǎng)膜色素上皮細(xì)胞。

2.根據(jù)權(quán)利要求1所述的制備方法，其中所述第一步在無血清條件下進(jìn)行。

3.根據(jù)權(quán)利要求1或2所述的制備方法，其中所述第一步在不存在飼養(yǎng)細(xì)胞的情況下進(jìn)行。

4.根據(jù)權(quán)利要求1至3中任一項所述的制備方法，其中所述第一步中的培養(yǎng)基還包含用于維持未分化狀態(tài)的因子。

5.根據(jù)權(quán)利要求4所述的制備方法，其中用于維持未分化狀態(tài)的所述因子是FGF信號轉(zhuǎn)導(dǎo)通路激動劑。

6.根據(jù)權(quán)利要求5所述的制備方法，其中所述FGF信號轉(zhuǎn)導(dǎo)通路激動劑是bFGF。

7.根據(jù)權(quán)利要求1至6中任一項所述的制備方法，其中所述FGF受體抑制劑是選自由PD173074和SU5402組成的組的至少一種類型。

8.根據(jù)權(quán)利要求1至7中任一項所述的制備方法，其中所述MEK抑制劑是選自由PD0325901、PD184352、U0126、TAK-733和AZD-8330組成的組的至少一種類型。

9.根據(jù)權(quán)利要求1至8中任一項所述的制備方法，其中所述Nodal信號轉(zhuǎn)導(dǎo)通路抑制劑是Alk4、5或7抑制劑。

10.根據(jù)權(quán)利要求9所述的制備方法，其中所述ALK4、5或7抑制劑是SB431542。

11.根據(jù)權(quán)利要求1至10中任一項所述的制備方法，其中所述Wnt信號轉(zhuǎn)導(dǎo)通路抑制劑是CKI-7。

12.根據(jù)權(quán)利要求1至11中任一項所述的制備方法，其中所述多能干細(xì)胞是靈長類動物多能干細(xì)胞。

13.根據(jù)權(quán)利要求1至12中任一項所述的制備方法，其中所述多能干細(xì)胞是人多能干細(xì)胞。

14.根據(jù)權(quán)利要求1至13中任一項所述的制備方法，其中所述第一步中的培養(yǎng)基是還包含BMP受體抑制劑的培養(yǎng)基。

15.根據(jù)權(quán)利要求14所述的制備方法，其中所述BMP受體抑制劑是ALK2/3抑制劑。

16.根據(jù)權(quán)利要求15所述的制備方法，其中所述ALK2/3抑制劑是LDN193189。

17.根據(jù)權(quán)利要求1至16中任一項所述的制備方法，其中所述第一步中的培養(yǎng)基還包含Sonic hedgehog信號轉(zhuǎn)導(dǎo)通路激動劑。

18.根據(jù)權(quán)利要求17所述的制備方法，其中所述Sonic hedgehog信號轉(zhuǎn)導(dǎo)通路激動劑是SAG。

19.根據(jù)權(quán)利要求1至18中任一項所述的制備方法，其中所述第一步中的培養(yǎng)基還包含PKC抑制劑。

20.根據(jù)權(quán)利要求19所述的制備方法，其中所述PKC抑制劑是Go6983。

21.根據(jù)權(quán)利要求1至20中任一項所述的制備方法，其中所述第一步中的培養(yǎng)時間是2天至13天。