[發明專利]用于檢測呼吸道合胞病毒抗原P的單克隆抗體

有效

• 申請號: 201680052944.0
• 申請日: 2016-07-25
• 公開（公告）號: CN108474017B
• 公開（公告）日: 2021-08-27
• 發明（設計）人: S·M·布埃諾拉米雷斯;A·M·卡萊伊斯帕拉;J·E·莫拉阿拉爾孔
• 申請（專利權）人: 智利天主教教皇大學
• 主分類號: C07K16/10
• 分類號: C07K16/10;C12P21/08;C12Q1/70;G01N33/53;C07H21/04
• 代理公司: 中國貿促會專利商標事務所有限公司 11038
• 代理人: 張小勇

本發明涉及結合呼吸道合胞病毒(RSV)的蛋白P的單克隆抗體或其片段，其包含具有與SEQ ID No:1或SEQ ID No:5具有至少90％、95％或99％的同一性的序列的重鏈可變區或具有與SEQ ID No:2或SEQ ID No:6具有至少90％、95％或99％的同一性的序列的輕鏈可變區。本發明還提供用于離體或體外檢測RSV的病毒性抗原P的診斷方法，其中使用由雜交瘤2E6/D2和6H5/H1產生和分泌的單克隆抗體。本發明能夠用于檢測RSV的試劑盒，其包含有所述雜交瘤產生的抗體。

發明領域

本發明涉及識別人呼吸道合胞病毒(RSV)的蛋白P的單克隆抗體或其片段，其可用于開發人RSV感染的診斷方法。

現有技術

由病毒引起的呼吸系統疾病是世界各地的公共健康問題。兒童人群中這些感染的主要原因是：人呼吸道合胞病毒(RSV)、腺病毒(ADV)、甲型和乙型流感病毒(INF A和B)、副流感病毒(PIV)和人偏肺病毒(MPV)。目前，沒有預防這些病毒的有效機制，并且每天產生大約9400 萬個新病例(世界衛生組織)。與暴發有關的衛生系統過飽和也會造成重大的經濟損失。

RSV是一種病毒，它影響呼吸系統，目前代表著巨大的經濟和社會相關性問題，影響到兒童和老年人的高水平的發病率和死亡率。在這些人群中，尤其是在嬰兒和兩歲以下的兒童中，RSV引起各種各樣的臨床表現，從更溫和的形式如鼻炎、扁桃體炎和中耳炎，以及其他更嚴重的形式如肺炎、支氣管炎、細支氣管炎和肺泡炎。血清學研究估計，70％至100％的兒童分別在1歲和2歲時已經至少暴露于該病毒一次。據已估計，每年RSV導致5歲以下的兒童感染約3400萬，住院340萬，死亡約20萬。目前，在智利和拉丁美洲，RSV是一種流行病學相關病毒。一些研究已經表明，RSV在新生兒和嬰兒中引起的呼吸系統感染病例的百分比可能高于冬季暴發期間的70％。此外，拉丁美洲的研究強化了RSV 作為2歲以下的個體中下呼吸道感染的主要感染原的作用，其報道發病率超過40％。不幸的是，現在沒有批準的疫苗用于免疫新生兒，也沒有有效的治療方法來控制這一人群的感染。

RSV是一種具有單鏈基因物質和負編碼極性的大約15.3kb的包膜 RNA病毒，其屬于副粘病毒科(Paramyxoviridae)并屬于肺病毒屬 (Pneumovirus)。RSV基因組編碼以下列方式分類的10個基因： 5′-NS1-NS2-N-P-M-SH-G-F-M2-L-3′，其由RNA依賴性RNA聚合酶(蛋白L)轉錄為10個獨立的信使RNA。這些蛋白中的五種負責基因材料的包裝以及定義病毒顆粒的自身結構，分別對應于核衣殼N的蛋白和基質M的蛋白，以及跨膜F、G和SH的糖蛋白。其他四種蛋白M2-1、 M2-2、L和P參與病毒復制和轉錄。此外，蛋白NS-1和NS-2是非結構蛋白，它們減少感染細胞的I型干擾素的表達，因此它們阻止了固有免疫應答的活化。

在公共衛生服務中，目前的診斷方法包括使用逆轉錄聚合酶鏈式反應(RT-PCR)和免疫層析測試(快速測試)的基于鼻咽拭子樣品中直接免疫熒光檢測病毒抗原的測試。從所提到的產品來看，基于免疫熒光的病毒檢測盒(viral panel)是最引人注目的，因為它們允許檢測最大數量的呼吸系統病毒，在利用Luminex xTAG進行呼吸系統病毒檢測盒 (RPV)PCR的情況下有12種類型，以及在eSensor呼吸系統病毒檢測盒的情況下有14種類型。盡管檢測范圍廣泛，但重要的是要注意它們使用的成本和響應時間因素。在第一個提到的測試的情況下，成本大約70 USD，響應時間為12至18小時，而第二個測試的成本大約90USD，響應時間60分鐘。

因此，用有效、快速和低成本的診斷測試來檢測RSV是非常重要的，它能夠與可用的診斷方法的特征相競爭。針對這樣的問題，本發明描述了單克隆抗體，它是用于提供所述需要的必要替代物，因為它們允許特異性識別來自感染RSV的患者的樣品中的病毒抗原。這樣，本發明包括諸如單克隆抗體的產品和一種替代方法，其使用單克隆抗體用于臨床樣品中RSV感染患者中具有100％特異性的檢測和快速、有效且準確的診斷，并且能夠通過ELISA檢測濃度等于1.5ng特異性抗原。這將允許臨床專業人員確定早期且合適的治療。