[發(fā)明專利]制造腎前體細(xì)胞的方法

有效

• 申請(qǐng)?zhí)枺?/td>: 201680052901.2
• 申請(qǐng)日: 2016-09-09
• 公開（公告）號(hào): CN108138136B
• 公開（公告）日: 2022-02-11
• 發(fā)明（設(shè)計(jì)）人: 川本達(dá)也;山岸幸子;長船健二
• 申請(qǐng)（專利權(quán)）人: 安斯泰來制藥株式會(huì)社;國立大學(xué)法人京都大學(xué)
• 主分類號(hào): C12N5/071
• 分類號(hào): C12N5/071;C12Q1/02;A61K35/22;A61P13/12
• 代理公司: 中原信達(dá)知識(shí)產(chǎn)權(quán)代理有限責(zé)任公司 11219
• 代理人: 魯雯雯;金龍河

本發(fā)明的課題在于提供通過對(duì)腎前體細(xì)胞特異性的細(xì)胞表面抗原標(biāo)志進(jìn)行鑒定而從由多能干細(xì)胞分化誘導(dǎo)成腎前體細(xì)胞的細(xì)胞群中獲取、制造純度高的腎前體細(xì)胞的方法。一種制造由多能干細(xì)胞分化誘導(dǎo)而成的腎前體細(xì)胞的方法，其包括：(i)將多能干細(xì)胞在誘導(dǎo)向腎前體細(xì)胞的分化的條件下進(jìn)行培養(yǎng)的步驟；和(ii)使用選自由CD9(?)、CD55(?)、CD106(+)、CD140a(+)、CD140b(+)、CD165(+)、CD271(+)和CD326(?)組成的組中的至少一種細(xì)胞表面標(biāo)志從步驟(i)中得到的細(xì)胞中篩選細(xì)胞群的步驟。

技術(shù)領(lǐng)域

本發(fā)明涉及使用用于從由多能干細(xì)胞分化而成的包含腎前體細(xì)胞的細(xì)胞群中獲取、制造高純度的腎前體細(xì)胞群的細(xì)胞表面標(biāo)志的、制造腎前體細(xì)胞的方法。

背景技術(shù)

腎臟是為了將生物體內(nèi)的因代謝活動(dòng)產(chǎn)生的有害物質(zhì)和廢物通過過濾從血中除去、實(shí)現(xiàn)身體健康的維持而發(fā)揮功能的重要器官之一。作為腎臟功能受損的嚴(yán)重疾病，有腎衰竭，但尚未建立有效的藥物療法，現(xiàn)狀是通過腎移植、人工透析來進(jìn)行治療。但是，腎移植存在嚴(yán)重的供體器官不足的問題，另一方面，人工透析存在不僅發(fā)生并發(fā)癥、而且醫(yī)療費(fèi)負(fù)擔(dān)龐大的問題，期望開發(fā)出新的治療方法。

另一方面，迄今為止報(bào)道了胚胎干細(xì)胞(Embryonic stem cell；ES細(xì)胞)、通過向體細(xì)胞中導(dǎo)入重編程因子而得到的誘導(dǎo)多能干細(xì)胞(induced pluripotent stem cell；iPS細(xì)胞)等具有多能性的細(xì)胞(專利文獻(xiàn)1和2)。目前，正在研究對(duì)由這些多能干細(xì)胞分化誘導(dǎo)而成的腎細(xì)胞進(jìn)行移植的、腎衰竭的治療方法的開發(fā)。此外，使用來源于這些多能干細(xì)胞的均一的腎細(xì)胞來進(jìn)行治療藥的開發(fā)也進(jìn)入了視野。

已知哺乳類的腎臟是經(jīng)過前腎、中腎、后腎這三個(gè)階段而形成的，其中后腎產(chǎn)生于中段中胚層的后方區(qū)域。在迄今為止的研究中，對(duì)從小鼠多能干細(xì)胞向中段中胚層分化誘導(dǎo)的方法進(jìn)行了研究(非專利文獻(xiàn)1)，確認(rèn)了奇跳相關(guān)轉(zhuǎn)錄因子1(Odd-Skipped RelatedTranscription Factor 1，OSR1)作為中段中胚層的特征性標(biāo)志。另外，作為腎前體細(xì)胞的特征性因子之一，已知有SIX同源異形盒2(SIX Homeobox 2，SIX2)(非專利文獻(xiàn)2和3)。使用細(xì)菌人工染色體(Bacterial artificial chromosome；BAC)載體，通過與內(nèi)源性的OSR1等位基因的同源重組，導(dǎo)入綠色熒光蛋白(Green Fluorescent Protein；GFP)基因而制作人iPS細(xì)胞(OSR1-GFP報(bào)告基因人iPS細(xì)胞)，使用該細(xì)胞進(jìn)行研究，由此成功地使用激活素A(Activin A)、Wnt蛋白、骨形成蛋白(Bone Morphogenetic Protein(BMP))和各種低分子化合物進(jìn)行了由人多能干細(xì)胞向中段中胚層的分化誘導(dǎo)(非專利文獻(xiàn)3、專利文獻(xiàn)3)。接著，使用與Mae等人(非專利文獻(xiàn)3)同樣的同源重組方法，制作在OSR1-GFP報(bào)告基因人iPS細(xì)胞株的SIX2基因位點(diǎn)導(dǎo)入有紅色熒光蛋白tdTomato的OSR1-GFPSIX2-tdTomato報(bào)告基因人iPS細(xì)胞株，使用該細(xì)胞進(jìn)行研究，由此成功地構(gòu)建了由人多能干細(xì)胞向腎前體細(xì)胞的分化誘導(dǎo)系統(tǒng)，并確認(rèn)了由該方法得到的腎前體細(xì)胞在急性腎損傷模型中的藥效(非專利文獻(xiàn)4、專利文獻(xiàn)4)。

現(xiàn)有技術(shù)文獻(xiàn)

專利文獻(xiàn)

專利文獻(xiàn)1：US5,843,780

專利文獻(xiàn)2：WO2007/069666

專利文獻(xiàn)3：WO2012/011610

專利文獻(xiàn)4：WO2014/200115

非專利文獻(xiàn)

非專利文獻(xiàn)1：Mae S，et al.，Biochem.Biophys.Res.Commun.，(2010)，393：877-882

非專利文獻(xiàn)2：Kobayashi A，et al.，Cell Stem Cell，(2008)，3：169-181