[發明專利]用于核酸酶介導的基因組工程化的遞送方法及組合物

有效

• 申請號: 201680052559.6
• 申請日: 2016-07-13
• 公開（公告）號: CN108024544B
• 公開（公告）日: 2022-04-29
• 發明（設計）人: G·K·李;B·E·賴利;S·J·圣馬丁;T·韋克斯勒
• 申請（專利權）人: 桑格摩生物治療股份有限公司
• 主分類號: A61K48/00
• 分類號: A61K48/00;A61K38/37;A61K38/48;A61K38/46;A61K39/00;A61P35/00;A61P7/04;C12N15/864
• 代理公司: 上海專利商標事務所有限公司 31100
• 代理人: 陶家蓉;錢文宇

本公開處于基因組工程化領域，更具體地說處于細胞基因組的靶向修飾的領域。

相關申請的交叉引用

本申請要求2015年7月13日提交的美國臨時申請號62/191,918；2015年10月28日提交的美國臨時專利申請號62/247,469；以及2016年3月30日提交的美國臨時專利申請號62/315,438的權益，所述申請的公開內容以引用方式整體并入本文。

技術領域

本公開處于基因組工程化領域，更具體地說處于細胞基因組的靶向修飾領域。

背景

已描述用于靶向裂解基因組DNA的各種方法和組合物。這些靶向裂解事件可用于例如誘導靶向誘變、誘導細胞DNA序列的靶向缺失以及促進預定染色體基因座處的靶向重組。參見，例如，美國專利號255,250；9,200,266；9,045,763；9,005,973；9,150,847；8,956,828；8,945,868；8,703,489；8,586,526；6,534,261；6,599,692；6,503,717；6,689,558；7,067,317；7,262,054；7,888,121；7,972,854；7,914,796；7,951,925；8,110,379；8,409,861；美國專利公布20030232410；20050208489；20050026157；20050064474；20060063231；20080159996；201000218264；20120017290；20110265198；20130137104；20130122591；20130177983；20130196373；20140120622；20150056705；20150335708；20160030477以及20160024474，所述專利的公開內容出于所有目的以引用方式整體并入。

這些方法經常涉及使用工程化裂解系統來誘導雙鏈斷裂(DSB)或靶DNA序列中的切口，以使得通過產生誤差的過程(諸如非同源末端連接(NHEJ))來修復斷裂或使用修復模板進行修復(同源定向修復或HDR)可導致基因敲除或目標序列插入(靶向整合)。可通過使用特異性核酸酶諸如工程化鋅指核酸酶(ZFN)、轉錄活化因子樣效應物核酸酶(TALEN)，使用具有指導特異性裂解的工程化crRNA/tracr RNA(‘單指導RNA’)的CRISPR/Cas系統(包括Cas和/或Cfp1)和/或使用基于Argonaute系統的核酸酶(例如，來自嗜熱棲熱菌(T.thermophilus)，稱為‘TtAgo’(Swarts等(2014)Nature 507(7491)：258-261)進行裂解。

可利用使用上述核酸酶系統之一進行的靶向裂解，以使用HDR或NHEJ介導的過程將核酸插入特定靶位置中。然而，向細胞遞送核酸酶系統和供體可能存在問題。例如，通過將質粒轉導至細胞中來遞送供體或核酸酶可能對受體細胞有毒性，特別是對作為原代細胞并因此不如來自細胞系的細胞一樣旺盛的細胞有毒性。

經常用于將核酸遞送至細胞的一種方法涉及使用病毒核酸遞送載體。具體而言，腺相關病毒(AAV)由于其有效性和相對無毒性而廣泛用于遞送核酸。AAV基因組可幾乎耗盡病毒核酸，并被編碼供體轉基因或工程化核酸酶的核酸替換以促進轉基因整合至受體細胞的DNA中。

哺乳動物細胞的AAV轉導依賴于靶細胞上的主要和次要共受體。雖然主要受體對于病毒初始粘附至靶細胞(及其趨性)是重要的，但是次要受體介導AAV病毒內吞至細胞中。例如，對于血清型AAV6，已將主要受體鑒定為α2,3N連接的唾液酸(Wu等，(2006)J.Virol.80(18):9093)，并且將次要受體鑒定為EGFR。此外，還已提出使用另外的次要共受體(Weller等，(2010)Nat Med 16(6)：662)。