[發明專利]MVD作為用于鑒定免疫細胞特別是CD56+NK細胞的表觀遺傳標志物

有效

• 申請號: 201680052340.6
• 申請日: 2016-09-22
• 公開（公告）號: CN108026577B
• 公開（公告）日: 2022-09-23
• 發明（設計）人: 斯文·歐萊克
• 申請（專利權）人: 精準醫療有限公司
• 主分類號: C12Q1/6881
• 分類號: C12Q1/6881
• 代理公司: 北京英賽嘉華知識產權代理有限責任公司 11204
• 代理人: 王達佐;洪欣

本發明涉及用于鑒定CD56+NK細胞的方法，特別是體外方法，其包括分析哺乳動物甲羥戊酸(二磷酸)脫羧酶(MVD)的基因區中至少一個CpG位置的甲基化狀態，其中當與非CD56+NK細胞相比時，所述基因區的去甲基化或缺乏甲基化指示CD56+NK細胞。本發明的分析可在表觀遺傳水平上鑒定CD56+NK細胞，并在復雜樣品(例如其他血液細胞或免疫細胞)中將其與所有其他細胞區分。此外，本發明提供了特別是在復雜樣品中定量CD56+NK細胞的改進的方法。可在沒有純化和/或富集細胞的步驟情況下，優選在全血和/或未經胰蛋白酶消化的組織中實施所述方法。

本發明涉及用于鑒定CD56+NK細胞的方法，特別是體外方法，其包括分析哺乳動物甲羥戊酸(二磷酸)脫羧酶(MVD)的基因區中至少一個CpG位置的甲基化狀態，其中當與非NK細胞相比時，所述基因區的去甲基化或缺乏甲基化指示CD56+NK細胞。本發明的分析可在表觀遺傳水平上鑒定CD56+NK細胞，并在復雜樣品(例如其他血液細胞或免疫細胞)中將其與所有其他細胞區分。此外，本發明提供了特別是在復雜樣品中定量CD56+NK細胞的改進的方法?？稍跊]有純化和/或富集細胞的步驟情況下，優選在全血和/或未經胰蛋白酶消化的組織中實施所述方法。

此外，本發明涉及用于實施上述方法的試劑盒及其相應的用途。本發明一個目的是提供一種定量檢測和測量哺乳動物的任何實體器官或組織或任何體液內的血液CD56+NK細胞的新的、更穩健的手段。

發明背景

自然殺傷細胞或NK細胞是一種類型的對先天性免疫系統至關重要的細胞毒性淋巴細胞。NK細胞發揮的作用類似于脊椎動物適應性免疫應答中的細胞毒性T細胞。NK表達NCAM-1分子，其聚集為CD56。NK細胞的另一經典標志物是FcγRIII，也稱為CD16。基于表面標志物CD16和CD56的相對表達，NK細胞可以細分為不同的群體。兩個主要的子集分別是CD56^亮CD16^暗/-和CD56^暗CD16⁺。在血液中，至少有兩個淋巴細胞群體(作為NK細胞)表達CD56，包括CD3+細胞，即表達NK標志物和T細胞標志物的一組細胞，有時稱為NKT細胞。CD3⁺CD56⁺細胞代表其他NK T細胞群體之一。

盡管個體中幾乎所有的細胞都含有完全相同的DNA編碼的互補物，但是高等生物必須在不同類型的組織中施加并保持不同的基因表達模式。大多數基因調控是瞬時的，這取決于細胞的當前狀態和外部刺激的變化。另一方面，持續性調控是表觀遺傳學的主要作用—不改變DNA的基本遺傳編碼的可遺傳的調控模式。DNA甲基化是表觀遺傳調控的典型形式；它作為細胞的穩定記憶，在維持各種細胞類型的長期身份中發揮著至關重要的作用。最近發現了其他形式的表觀遺傳調控。除了“第五個堿基”5-甲基胞嘧啶(mC)，可發現第六個(5-羥甲基胞嘧啶，hmC)、第七個(5-甲?；奏ぃ琭C)和第八個(5-羧基胞嘧啶，cC)堿基(Michael J.Booth et al.Quantitative Sequencing of 5-Methylcytosine and 5-Hydroxymethylcytosine at Single-Base Resolution Science 18May 2012,Vol.336no.6083pp.934-937)。

所提到的DNA修飾的主要靶標是兩個核苷酸的序列胞嘧啶-鳥嘌呤(“CpG位點”)；在此情況下，胞嘧啶(C)可經簡單的化學修飾以變成甲?；?、甲基化的、羥甲基化的或羧化的。在人類基因組中，除了在被稱為“CpG島”的某些相對密集簇之外，CG序列比預期更罕見。CpG島通常與基因啟動子相關，估計超過一半的人類基因具有CpG島(Antequera andBird,Proc Natl Acad Sci USA 90:11995-9,1993)。