[發(fā)明專利]使用經(jīng)掩蔽的半抗原在福爾馬林固定石蠟包埋的組織中的蛋白質(zhì)鄰近測定

有效

• 申請?zhí)枺?/td>: 201680049897.4
• 申請日: 2016-08-26
• 公開（公告）號: CN107923915B
• 公開（公告）日: 2021-05-04
• 發(fā)明（設(shè)計）人: Y·貝勒斯拉德塞維;T·D·德格;W·J·弗蘭池;J·郝;B·D·凱麗;A·穆律羅;N·W·波拉斯克
• 申請（專利權(quán)）人: 文塔納醫(yī)療系統(tǒng)公司
• 主分類號: G01N33/58
• 分類號: G01N33/58;G01N33/53
• 代理公司: 北京坤瑞律師事務(wù)所 11494
• 代理人: 封新琴

1.一種經(jīng)掩蔽的半抗原-抗體綴合物，其具有式(IV)的結(jié)構(gòu)：

其中抗體為一級抗體，所述一級抗體對選自以下的靶標(biāo)具有特異性：PD-L1/CD80；CTLA-4/CD80；CTLA-4/CD86；PD-L2/PD-1；ErbB家族的任意組合；DNA混合匹配修復(fù)蛋白的任意組合；翻譯后修飾-磷酸化蛋白；和翻譯后修飾-泛素化蛋白，

Z為鍵或基團，所述基團包含支化或非支化、經(jīng)取代或未經(jīng)取代、飽和或不飽和的具有1-30個碳原子的脂族基團，并且任選具有一個或多個選自O(shè)、N或S的雜原子，

半抗原為選自吡唑類、硝基苯基化合物類、苯并呋咱類、苯并呋喃類、三萜類、脲類、硫脲類、魚藤酮和魚藤酮衍生物、噁唑類、噻唑類、香豆素和香豆素衍生物、硝基芳基類、環(huán)木脂素類、生物素、地高辛、熒光素、2-羥基喹喔啉和二硝基苯基的半抗原；

A為鍵或基團，所述基團包含支化或非支化、經(jīng)取代或未經(jīng)取代、飽和或不飽和的具有1-15個碳原子的脂族基團，并且任選具有一個或多個選自O(shè)、N或S的雜原子；

q為0或1；

n為1-25范圍內(nèi)的整數(shù)；且

所述掩蔽基團具有式(II)的結(jié)構(gòu)：

其中

R¹獨立選自H、F、Cl、Br、I、-O-甲基、-O-乙基、-O-正丙基、-O-異丙基、-O-正丁基、-O-仲丁基或-O-異丁基；具有1-4個碳原子的-S-烷基；具有1-4個碳原子的-O-烷基；具有1-4個碳原子的-N(H)-烷基；具有1-6個碳原子的-N-(烷基)₂；具有1-4個碳原子且任選取代有N或S的烷基；氰基；和羧基；且

R²為酶底物，其中所述酶底物選自磷酸酯基、酯基、酰胺基、硫酸酯基、糖苷基、脲基和硝基。

2.權(quán)利要求1的經(jīng)掩蔽的半抗原-抗體綴合物，其中所述掩蔽基團具有式(IIB)的結(jié)構(gòu)：

或式(IIC)的結(jié)構(gòu)：

或式(IID)的結(jié)構(gòu)：

且

其中R²選自磷酸酯基、酯基、酰胺基、硫酸酯基、糖苷基、脲基和硝基。

3.權(quán)利要求2的經(jīng)掩蔽的半抗原-抗體綴合物，其中每個R¹基團不同。

4.權(quán)利要求1-3任一項的經(jīng)掩蔽的半抗原-抗體綴合物，其中ErbB家族的成員是Her1、Her2、Her3和/或Her4。

5.權(quán)利要求1-3任一項的經(jīng)掩蔽的半抗原-抗體綴合物，其中DNA混合匹配修復(fù)蛋白是MLH1、MLH3、MSH2、MSH3、MSH6、PMS1和/或PMS2。

6.權(quán)利要求1-3任一項的經(jīng)掩蔽的半抗原-抗體綴合物，其中翻譯后修飾-磷酸化蛋白包含磷酸化酪氨酸、磷酸化絲氨酸、磷酸化蘇氨酸、或磷酸化組氨酸。

7.一種用于分析樣品以確定第一靶標(biāo)是否與第二靶標(biāo)鄰近的方法，所述方法包括：

(a)使樣品與權(quán)利要求1-6任一項的對第一靶標(biāo)具有特異性的經(jīng)掩蔽的半抗原-抗體綴合物接觸，以形成第一靶標(biāo)-經(jīng)掩蔽的半抗原-抗體綴合物復(fù)合物；

(b)使樣品與對第二靶標(biāo)具有特異性的暴露酶-抗體綴合物接觸，以形成第二靶標(biāo)-暴露酶-抗體綴合物復(fù)合物，其中選擇暴露酶-抗體綴合物的暴露酶，從而使得其能夠與經(jīng)掩蔽的半抗原-抗體綴合物的酶底物部分反應(yīng)，以形成第一靶標(biāo)-暴露半抗原-抗體綴合物復(fù)合物；

(c)使樣品與第一檢測試劑接觸，以標(biāo)記第一靶標(biāo)-暴露半抗原-抗體綴合物復(fù)合物或第一靶標(biāo)；和

(d)檢測經(jīng)標(biāo)記的第一靶標(biāo)-暴露半抗原-抗體綴合物復(fù)合物或經(jīng)標(biāo)記的第一靶標(biāo)。

8.權(quán)利要求7的方法，其中經(jīng)掩蔽的半抗原-抗體綴合物的經(jīng)掩蔽的半抗原衍生自選自以下的半抗原：7-(二乙基氨基)香豆素-3-羧酸、生物素、硝基吡唑、噻唑磺酰胺、苯并呋咱和2-羥基喹喔啉。