[發明專利]新型α-1,3-葡聚糖酶

在審

• 申請號: 201680047142.0
• 申請日: 2016-07-15
• 公開（公告）號: CN108026520A
• 公開（公告）日: 2018-05-11
• 發明（設計）人: 潘在龜;金義中;梁宅鎬;李東范;金恩英;李慧琳;姜正賢
• 申請（專利權）人: 杰諾福克斯公司
• 主分類號: C12N9/24
• 分類號: C12N9/24;C12N15/63;A61K8/66
• 代理公司: 北京坤瑞律師事務所 11494
• 代理人: 陳桉

本發明涉及新型α?1,3?葡聚糖酶，并且更具體地，涉及衍生自哈茨木霉(Trichoderma harzianum)的新型α?1,3?葡聚糖酶，編碼所述新型α?1,3?葡聚糖酶的基因，含有所述基因的重組載體和重組微生物，以及通過使用所述重組微生物制備α?1,3?葡聚糖酶的方法。根據本發明的新型α?1,3?葡聚糖酶可有效地分解變聚糖(一種微生物生物膜的組分)，并且因此用于口腔衛生產品和醫藥領域中。

技術領域

本發明涉及新型α-1,3-葡聚糖酶，并且更具體地涉及來自哈茨木霉(Trichodermaharzianum)的新型α-1,3-葡聚糖酶，編碼所述新型α-1,3-葡聚糖酶的基因，含有所述基因的重組載體和重組微生物，以及使用所述重組微生物產生α-1,3-葡聚糖酶的方法。

背景技術

變異鏈球菌(Streptococcus mutans)是在口腔中在牙菌斑形成中起重要作用的微生物，并且已知與蛀牙最密切相關。該微生物具有在細胞外基質中將糖降解成合成不可溶葡聚糖的能力。合成的葡聚糖是具有α-1,6鍵和α-1,3鍵兩者的糖聚合物，由于其高粘性和水不溶性在牙齒表面形成生物膜，促進變異鏈球菌的粘附，并聚集多種細菌。通過粘附變異鏈球菌等在此生物膜中產生的有機酸引起牙釉質或組織的脫礦化以引起蛀牙。此外，已知形成的生物膜還在牙周炎的發展和進展中起主要作用。

牙菌斑包含葡聚糖，即葡萄糖的聚合物，并且果聚糖是果糖的聚合物。葡聚糖分為三種類型：右旋糖酐，其單獨具有α-1,6-葡萄糖鍵；水溶性葡聚糖，其具有α-1,6-葡萄糖鍵作為主鍵；和水不溶性葡聚糖(即，變聚糖)，其具有α-1,3-葡萄糖鍵作為主鍵(Rolla etal.,1985)。由變異鏈球菌產生的變聚糖包含80-90％α-1,3-葡萄糖鍵和為α-1,6-葡萄糖鍵的剩余物。

右旋糖酐酶降解牙菌斑的α-1,6-葡萄糖鍵。已知真菌來源的右旋糖酐酶基因包括來自青霉屬(Penicillium)、擬青霉屬(Paecilomyces)、曲霉菌屬(Aspergillus)、鐮刀菌屬(Fusarium)、穗霉屬(Spicaria)、輪枝孢屬(Verticillium)、長蠕孢屬(Helminthosporium)、黑毛菌屬(Chaetomium)等的基因，并且已知細菌來源的右旋糖酐酶基因包括來自乳桿菌屬(Lactobacillus)、鏈球菌屬(Streptococcus)、纖維弧菌屬(Cellvibrio)、纖維粘菌屬(Cytophaga)、短頸細菌屬(Brevibacterium)、假單胞菌屬(Pseudomonas)、棒桿菌屬(Corynebacterium)、節桿菌屬(Arthrobacter)、黃桿菌屬(Flavobacterium)等的基因。

在外國，天野酶制品株式會社(Amano Co.Ltd.)，即一家日本酶公司，推出衍生自淡紫色擬青霉(Paecilomyces lilacinus)的右旋糖酐酶產物。該右旋糖酐酶產物主要用來去除在從甘蔗產生糖的過程中由污染物細菌產生的右旋糖酐，并且其還用于一些口腔產品中。

可從獅王株式會社(Lion Co.Ltd.)(日本)商購的Clinica Lion(產品名稱)還包含含有三氯生(triclosan)的右旋糖酐酶。盡管三氯生可臨時性地降低變異鏈球菌，但是預期單獨的右旋糖酐酶不會具有足以降解牙菌斑的能力。

在韓國，開發了來自泡菜乳酸菌(Kimchi lactic acid bacteria)的新型右旋糖酐酶，并且推出了含有右旋糖酐酶和葡萄糖氧化酶的牙膏。然而，它們在商業上沒有成功，因為右旋糖酐酶對于生物膜降解的作用不足。