[發明專利]用于CHO細胞中經改善的瞬時蛋白質表達的系統和方法

在審

• 申請號: 201680046979.3
• 申請日: 2016-07-13
• 公開（公告）號: CN107922961A
• 公開（公告）日: 2018-04-17
• 發明（設計）人: J·茲穆達;劉超燕
• 申請（專利權）人: 生命技術公司
• 主分類號: C12P21/02
• 分類號: C12P21/02;C12N5/00
• 代理公司: 北京派特恩知識產權代理有限公司11270
• 代理人: 康艷青,姚開麗

1.一種用于在所培養的懸浮CHO細胞中產生重組型蛋白質的方法，所述方法包含：

獲得CHO細胞的懸浮培養物，所述CHO細胞適應在高密度培養條件下生長，

在經調適以允許懸浮CHO細胞生長的高密度生長培養基中，以約2×10⁶到約2×10⁷個細胞/毫升之間的細胞密度培養所述CHO細胞；

在轉染試劑存在下用表達載體轉染所述CHO細胞，所述表達載體包含能夠產生經表達的蛋白質的核酸序列；

培育所述經轉染的CHO細胞第一時間段；

使所述經轉染的CHO細胞與至少一種表達增強劑組合物和至少一種生長調節劑組合物接觸；

在使得所述表達載體表達所述蛋白質的條件下，在存在所述轉染增強劑和生長調節劑情況下培育所述經轉染的CHO細胞第二時間段；以及

收集所述經轉染的CHO細胞并且分離所述經表達的蛋白質。

2.根據權利要求1所述的方法，其中在所述第二時間段之后，使所述經轉染的細胞第二次與所述生長調節劑組合物接觸并且培育所述經轉染的細胞第三時間段，隨后收集所述經轉染的CHO細胞且分離所述經表達的蛋白質。

3.根據權利要求2所述的方法，其中所述第三時間段可以是最多約20天、最多約15天、最多約14天、最多約13天、最多約12天、最多約11天、最多約10天、最多約9天、最多約8天、最多約7天、最多約6天、最多約5天、最多約4天、約20天、約15天、約14天、約13天、約12天、約11天、約10天、約9天、約8天、約7天、約6天、約5天、約4天。

4.根據權利要求1所述的方法，其中在所述經轉染的細胞與所述表達增強劑組合物和所述生長調節劑組合物接觸之后，在低于37℃且高于30℃的溫度下培養所述經轉染的細胞。

5.根據權利要求4所述的方法，其中在低于35℃且高于31℃的溫度下培養所述經轉染的細胞。

6.根據權利要求4所述的方法，其中在約32℃的溫度下培養所述經轉染的細胞。

7.根據權利要求1所述的方法，其中所述懸浮液CHO細胞是CHO-S細胞或CHO-S細胞的衍生物，其適應在高密度培養條件下生長。

8.根據權利要求1所述的方法，其中所述懸浮CHO細胞是CHO-S-2H2細胞或CHO-S-純系14細胞。

9.根據權利要求1所述的方法，其中在轉染之前以約3×10⁶到約15×10⁶個細胞/毫升、約3.5×10⁶到約12×10⁶個細胞/毫升、約4×10⁶到約10×10⁶個細胞/毫升、約4.5×10⁶到約9×10⁶個細胞/毫升、約5×10⁶到約8×10⁶個細胞/毫升、約5.5×10⁶到約7×10⁶個細胞/毫升、約6×10⁶到約6.5×10⁶個細胞/毫升、約6×10⁶到約6.25×10⁶個細胞/毫升之間或約6×10⁶個細胞/毫升的細胞密度培養所述懸浮CHO細胞。

10.根據權利要求1所述的方法，其中所述轉染試劑包括陽離子性脂質或基于聚合胺的轉染試劑。

11.根據權利要求1所述的方法，其中所述轉染試劑包括聚乙烯亞胺(PEI)或其衍生物。

12.根據權利要求11所述的方法，其中所述PEI是線形PEI。

13.根據權利要求1所述的方法，其中所述轉染試劑包含陽離子性脂質。

14.根據權利要求13所述的方法，其中使陽離子性脂質與所述表達物接觸以形成轉染復合物，隨后轉染所述懸浮CHO細胞。

15.根據權利要求14所述的方法，其中在高于0℃且低于20℃、低于15℃、低于10℃、低于8℃或低于5℃的溫度下形成所述轉染復合物。