[發明專利]用于改善移植的CRISPR/CAS相關方法和組合物

有效

• 申請號: 201680046875.2
• 申請日: 2016-06-09
• 公開（公告）號: CN108026526B
• 公開（公告）日: 2023-05-12
• 發明（設計）人: J·L·戈里;王童瑤;H·嘉亞拉穆;P·奧唐納爾
• 申請（專利權）人: 愛迪塔斯醫藥公司
• 主分類號: C12N15/11
• 分類號: C12N15/11
• 代理公司: 北京市金杜律師事務所 11256
• 代理人: 陳文平;侯寶光

1.一種產生免疫相容性血細胞的方法，所述方法包括：

使血細胞與第一等位基因特異性gRNA分子和Cas9分子接觸，其中所述第一等位基因特異性gRNA分子和所述Cas9分子與內源性人類白細胞抗原(HLA)基因的第一等位基因締合，

其中所述第一等位基因特異性gRNA分子和所述Cas9分子與所述HLA基因的單個等位基因締合，

由此修飾所述內源性HLA基因的第一等位基因并且產生免疫相容性血細胞。

2.一種修飾血細胞中內源性人類白細胞抗原(HLA)基因的方法，所述方法包括：

使用數據庫模式來選擇第一等位基因特異性gRNA分子，以及

使所述血細胞與所述第一等位基因特異性gRNA分子和Cas9分子接觸，其中所述等位基因特異性gRNA分子和所述Cas9分子與所述內源性HLA基因的第一等位基因締合，

其中所述第一等位基因特異性gRNA分子和所述Cas9分子與所述HLA基因的單個等位基因締合，

由此修飾所述內源性HLA基因的第一等位基因。

3.一種降低血細胞中由內源性人類白細胞抗原(HLA)基因的第一等位基因編碼的蛋白的細胞表面表達的方法，所述方法包括：

使所述血細胞與第一等位基因特異性gRNA分子和Cas9分子接觸，其中所述等位基因特異性gRNA分子和所述Cas9分子與所述內源性HLA基因的第一等位基因締合，

其中所述第一等位基因特異性gRNA分子和所述Cas9分子與所述HLA基因的單個等位基因締合，

由此降低由所述內源性HLA基因的第一等位基因編碼的蛋白的細胞表面表達。

4.一種產生單倍型修飾的血細胞的方法，所述方法包括：

使從在內源性人類白細胞抗原(HLA)基因處具有第一單倍型的受試者分離的血細胞與第一等位基因特異性gRNA分子和Cas9分子接觸，其中所述第一等位基因特異性gRNA分子和所述Cas9分子與所述內源性HLA基因的第一等位基因締合，

其中所述第一等位基因特異性gRNA分子和所述Cas9分子與所述HLA基因的單個等位基因締合，

由此修飾所述內源性HLA基因的第一等位基因。

5.一種制備包含具有等位基因特異性基因修飾的細胞群體的組合物的離體方法，所述方法包括：

使細胞群體與等位基因特異性gRNA分子和Cas9分子接觸，其中所述等位基因特異性gRNA分子和所述Cas9分子與編碼可識別的基因產物的HLA基因的單個等位基因締合；以及

富集表達所述可識別的HLA基因產物但不表達所述HLA基因的單個等位基因的細胞，

其中所述細胞群體是血細胞群體。

6.如權利要求5所述的方法，其中所述血細胞是造血干細胞/祖細胞。

7.如權利要求5或6所述的方法，其中所述細胞群體選自下組，該組由以下組成：循環血細胞群體、動員的血細胞群體、骨髓細胞群體、髓樣祖細胞群體、淋巴樣祖細胞群體、淋巴樣細胞群體、多能祖細胞群體、譜系限制性祖細胞群體、內皮細胞群體、或間充質基質細胞群體、或其組合。

8.如權利要求1-4中任一項所述的方法，其中所述血細胞是干細胞。

9.如權利要求4所述的方法，其中所述干細胞是造血干細胞/祖細胞。

10.如權利要求1-4、8和9中任一項所述的方法，其中所述細胞選自下組，該組由以下組成：循環血細胞、動員的血細胞、骨髓細胞、髓樣祖細胞、淋巴樣祖細胞、淋巴樣細胞、多能祖細胞、譜系限制性祖細胞、內皮細胞或間充質基質細胞。

11.如權利要求1-10中任一項所述的方法，其中所述gRNA分子是修飾的gRNA分子。