[發明專利]調節重組蛋白生產樣態的方法

有效

• 申請號: 201680042092.7
• 申請日: 2016-07-07
• 公開（公告）號: CN107849526B
• 公開（公告）日: 2021-12-14
• 發明（設計）人: A·穆爾;D·布魯爾曼;M·喬丹;H·布羅利;M·斯泰特勒
• 申請（專利權）人: 阿雷斯貿易股份有限公司
• 主分類號: C12N5/00
• 分類號: C12N5/00;C12N15/09
• 代理公司: 上海專利商標事務所有限公司 31100
• 代理人: 余穎;江磊

本發明屬于細胞培養領域。具體地說，本發明涉及培養表達重組蛋白的宿主細胞的方法，所述宿主細胞培養在含有或補加有效量4,4’?二異硫氰芪?2,2’?二磺酸(DIDS)的細胞培養基中，所述蛋白質的生產因此高于不含DIDS條件下培養的細胞。

技術領域

本發明屬于細胞培養領域。具體地說，本發明涉及培養表達重組蛋白的宿主細胞的方法，所述宿主細胞培養在含有或補加有效量4,4’-二異硫氰芪-2,2’-二磺酸(DIDS)的細胞培養基中，所述蛋白的生產因此高于不含DIDS條件下培養的細胞。

背景技術

優化培養條件以實現盡可能高的生產率是重組蛋白生產的主要目標之一。即便是生產率的邊際增益也可能具有重大的經濟意義。許多工業蛋白質是在宿主細胞中重組生產的。因此需要以高效且高成本效益的方式來進行生產。然而，重組蛋白生產的缺陷之一是細胞培養條件往往易至細胞活力逐漸降低，既降低生產效率又降低總體生產率。

灌注培養、分批培養和補料分批培養是培養動物細胞生產重組蛋白的主要方法。

非常常見的是，尤其在補料分批法和灌注法中，向培養基中添加誘導劑來增強細胞的蛋白質生產。這些誘導劑誘導細胞產出更多需要的產物。誘導劑之一是丁酸鈉。然而，細胞培養采用丁酸鈉的缺點是它嚴重影響細胞活力。例如Kim等(2004)曾報道：丁酸鈉能夠在分批培養中提高重組CHO細胞的蛋白質生產，但在生產周期終點(8天的培養之后)細胞活力低于45％。在灌注分批培養中重復實驗發現，處理6天，細胞活力降至15％。

盡管用誘導劑能提高蛋白質生產，細胞活力方面的缺點不容忽視。事實上，采用常用誘導劑例如丁酸鈉可能在培養約5天后開始對生產不利，但是，補料分批模式的生產周期通常為12至15天，灌注模式的可長達40-45天。

因為許多蛋白質是由培養物中培養的細胞重組生產的且培養期超過6天，所以需要既能提高細胞生產率又能提高生產運行效率、同時還能將細胞活力長時間維持在可接受水平的方法。

所以，需要能夠實現以下效果的培養條件和生產方法：維持高細胞密度、提高滴度和/或避免生產周期內細胞活力嚴重下降，由此提高重組蛋白生產率。本發明提供了提高重組蛋白生產的方法和組合物，滿足了這一需求。

發明概述

內容之一，本發明提供提高重組蛋白生產的方法，所述方法包括在細胞培養基中培養表達所述蛋白質的宿主細胞，所述細胞培養基含有效量的4,4’-二異硫氰芪-2,2’-二磺酸(DIDS)或補加有效量的DIDS。

另一項內容，本發明提供提高重組蛋白生產的方法，所述方法包括在細胞培養基中培養表達所述蛋白質的宿主細胞，所述細胞培養基補加至少一批包含有效量的DIDS的補料。

再一項內容，本發明提供培養表達重組蛋白的宿主細胞的方法，所述方法包括在細胞培養基中培養所述宿主細胞，所述細胞培養基包含有效量的DIDS或補加有效量的DIDS。

再一項內容，本發明提供包含細胞培養基的組合物，所述細胞培養基包含有效量的DIDS或補加有效量的DIDS。

再一項內容，本發明提供4,4’-二異硫氰芪-2,2’-二磺酸(DIDS)用于細胞培養基中提高重組蛋白生產的用途。

附圖說明

圖1顯示活細胞密度(圖1A)和活力(圖1B)對時間(至第14天)的曲線以及第14天的滴度(圖1C)，其中的宿主細胞表達抗體mAb1，與不同濃度的DIDS培養在微孔板上。結果表示為平均值±標準差。圖1A和1B圖例相同。

圖2顯示微孔板上不同濃度DIDS下分泌的抗體mAb1的質量分析。糖基化狀態用CGE-LIF檢測法分析。