[發(fā)明專利]在親和層析中減少宿主細(xì)胞蛋白的方法

有效

• 申請(qǐng)?zhí)枺?/td>: 201680042079.1
• 申請(qǐng)日: 2016-08-18
• 公開（公告）號(hào): CN107849087B
• 公開（公告）日: 2022-09-06
• 發(fā)明（設(shè)計(jì)）人: P·麥克唐納;R·圣約翰;M·翁;R·法爾肯施泰因;W·克恩萊因;K·施萬德納;B·斯彭斯伯格;M·維德曼;F·策特爾;A·克萊因章斯;C·科普;B·特蘭;R·埃里克森
• 申請(qǐng)（專利權(quán)）人: 豪夫邁·羅氏有限公司;基因技術(shù)公司
• 主分類號(hào): C07K1/22
• 分類號(hào): C07K1/22;C07K16/10;C07K16/22;C07K16/24;C07K16/28;C07K16/46
• 代理公司: 北京市中咨律師事務(wù)所 11247
• 代理人: 柴云峰;黃革生

1.低電導(dǎo)率水溶液在蛋白A層析的洗滌步驟中降低宿主細(xì)胞蛋白的含量的用途，其中蛋白A層析用于純化人IgG4或IgG1同種型抗體，其中低電導(dǎo)率水溶液具有0.5mS/cm或更小的電導(dǎo)率值，其中所述宿主細(xì)胞蛋白是磷脂酶B樣2(PLBL2)或簇蛋白，其中所述低電導(dǎo)率水溶液包含0.1mM至8mM Tris或0.05mM至2mM磷酸鉀，其中所述低電導(dǎo)率水溶液具有7或更高的pH，其中所述人IgG4同種型抗體是針對(duì)P-選擇蛋白的抗體或針對(duì)因子IXa和因子X的抗體或針對(duì)IL-13的抗體或針對(duì)β淀粉狀蛋白的抗體，并且其中所述人IgG1同種型抗體是針對(duì)乙型流感的抗體或針對(duì)VEGF-A的抗體或針對(duì)CD22的抗體或針對(duì)HER3和EGFR的雙特異性抗體或針對(duì)β淀粉狀蛋白的抗體或針對(duì)Her2的抗體或針對(duì)Ang2和VEGF-A的雙特異性抗體或針對(duì)癌胚抗原(CEA)和CD3的雙特異性抗體。

2.根據(jù)權(quán)利要求1所述的用途，其中所述低電導(dǎo)率水溶液洗滌步驟之前或之后是高電導(dǎo)率水溶液洗滌步驟。

3.根據(jù)權(quán)利要求2所述的用途，其中所述高電導(dǎo)率水溶液具有20mS/cm或更高的電導(dǎo)率值。

4.根據(jù)權(quán)利要求2所述的用途，其中所述高電導(dǎo)率水溶液包含組氨酸。

5.產(chǎn)生人IgG4或IgG1同種型抗體的方法，包括以下步驟：

a)培養(yǎng)包含編碼人IgG4或IgG1同種型抗體的核酸的細(xì)胞，

b)從細(xì)胞或培養(yǎng)基中回收人IgG4或IgG1同種型抗體，

c)使人IgG4或IgG1同種型抗體與蛋白A層析材料接觸，

d)用低電導(dǎo)率水溶液洗滌蛋白A層析材料，其中所述低電導(dǎo)率水溶液具有0.5mS/cm或更小的電導(dǎo)率值，其中所述宿主細(xì)胞蛋白的量減少，并且其中所述宿主細(xì)胞蛋白是磷脂酶B樣2(PLBL2)或簇蛋白，

e)從蛋白A層析材料中回收人IgG4或IgG1同種型抗體，

從而產(chǎn)生人IgG4或IgG1同種型抗體，

其中所述低電導(dǎo)率水溶液包含0.1mM至8mM Tris或0.05mM至2mM磷酸鉀，其中所述低電導(dǎo)率水溶液具有7或更高的pH，其中所述人IgG4同種型抗體是針對(duì)P-選擇蛋白的抗體或針對(duì)因子IXa和因子X的抗體或針對(duì)IL-13的抗體或針對(duì)β淀粉狀蛋白的抗體，并且其中所述人IgG1同種型抗體是針對(duì)乙型流感的抗體或針對(duì)VEGF-A的抗體或針對(duì)CD22的抗體或針對(duì)HER3和EGFR的雙特異性抗體或針對(duì)β淀粉狀蛋白的抗體或針對(duì)Her2的抗體或針對(duì)Ang2和VEGF-A的雙特異性抗體或針對(duì)癌胚抗原(CEA)和CD3的雙特異性抗體。

6.從樣品中純化人IgG4或IgG1同種型抗體的方法，包括以下步驟：

a)提供包含人IgG4或IgG1同種型抗體的樣品，

b)用蛋白A層析法/步驟純化人IgG4或IgG1同種型抗體，包括用低電導(dǎo)率水溶液洗滌蛋白A層析材料，其中所述低電導(dǎo)率水溶液具有0.5mS/cm或更小的電導(dǎo)率值，其中所述宿主細(xì)胞蛋白的量減少，并且其中所述宿主細(xì)胞蛋白是磷脂酶B樣2(PLBL2)或簇蛋白，

其中所述低電導(dǎo)率水溶液包含0.1mM至8mM Tris或0.05mM至2mM磷酸鉀，其中所述低電導(dǎo)率水溶液具有7或更高的pH，其中所述人IgG4同種型抗體是針對(duì)P-選擇蛋白的抗體或針對(duì)因子IXa和因子X的抗體或針對(duì)IL-13的抗體或針對(duì)β淀粉狀蛋白的抗體，并且其中所述人IgG1同種型抗體是針對(duì)乙型流感的抗體或針對(duì)VEGF-A的抗體或針對(duì)CD22的抗體或針對(duì)HER3和EGFR的雙特異性抗體或針對(duì)β淀粉狀蛋白的抗體或針對(duì)Her2的抗體或針對(duì)Ang2和VEGF-A的雙特異性抗體或針對(duì)癌胚抗原(CEA)和CD3的雙特異性抗體。

7.根據(jù)權(quán)利要求5至6中任一項(xiàng)所述的方法，其中所述方法另外包括用低電導(dǎo)率水溶液洗滌所述蛋白A層析材料之前或之后，用高電導(dǎo)率水溶液和/或用中等電導(dǎo)率水溶液洗滌所述親和層析材料。

8.根據(jù)權(quán)利要求7所述的方法，其中所述高電導(dǎo)率水溶液具有20mS/cm或更高的電導(dǎo)率值。