[發明專利]用于改進的植物性狀的經過設計的復合內生菌組合物和方法

在審

• 申請號: 201680039139.4
• 申請日: 2016-04-29
• 公開（公告）號: CN108271340A
• 公開（公告）日: 2018-07-10
• 發明（設計）人: K·V·安布羅斯;B·A·博格希吉安;S·迪喬諾維克;P·A·格雷;G·V·托萊多;L·M·馬爾克斯;J·N·佩洛斯;G·馮馬爾特扎恩
• 申請（專利權）人: 靛藍農業公司
• 主分類號: A01C1/06
• 分類號: A01C1/06;A01G7/06;A01H17/00;A01N63/02;A01N63/04
• 代理公司: 北京市金杜律師事務所 11256
• 代理人: 陳文平;徐志明

1.一種產生包含在異源真菌內的至少一種細菌的經過設計的復合內生菌的方法，所述方法包括：

a.分離并且純化細菌；

b.分離并且純化真菌；

c.在液體培養基中共培養所述細菌與所述真菌；和

d.在不超過35.5℃的溫度下孵育所述共培養的細菌和真菌。

2.如權利要求1所述的方法，其中步驟a)是在選自由以下組成的組的溫度范圍下進行的：18℃與36℃之間、20℃與30℃之間、20℃與26℃之間、20.0℃與25.5℃之間、22.0℃與25.0℃之間和23.0℃與24.0℃之間。

3.如權利要求1所述的方法，其在步驟b)之后進一步包括：用一種或多種抗生素處理所述真菌以從所述真菌消除任何組分細菌。

4.如權利要求1至3中任一項所述的方法，其進一步包括將所述共培養物接種于2％水瓊脂上持續最少1周，接著將所述共培養物轉移至全強度PDA/LB瓊脂。

5.如權利要求1至4中任一項所述的方法，其中所述共培養的細菌和真菌是在選自由以下組成的組的溫度范圍下孵育：18℃與36℃之間、20℃與30℃之間、20℃與26℃之間、20.0℃與25.5℃之間、22.0℃與25.0℃之間和23.0℃與24.0℃之間。

6.如權利要求1至5中任一項所述的方法，其中所述孵育的共培養的細菌和真菌進一步用慶大霉素處理。

7.如權利要求1至6中任一項所述的方法，其中所述共培養的細菌和真菌進一步用慶大霉素接種至肉湯和/或瓊脂上。

8.如權利要求6或權利要求7所述的方法，其中所述培養物用氯化鎂洗滌不少于三次。

9.如權利要求6或權利要求7所述的方法，其中慶大霉素的濃度是選自由以下組成的組：5微克/mL、20微克/mL、50微克/mL和75微克/mL。

10.一種合成組合物，其包含封裝異源內生細菌的內生真菌。

11.如權利要求10所述的合成組合物，其進一步包含植物元素。

12.如權利要求11所述的合成組合物，其中所述合成組合物能夠向所述植物元素或與所述植物元素締合的植物提供具有農藝重要性的性狀。

13.一種合成組合物，其包含與經過設計的復合內生菌締合的植物元素，其中所述經過設計的復合內生菌能夠向所述植物元素或與所述植物元素締合的植物提供具有農藝重要性的性狀。