[發明專利]檢測染色體畸變的方法

有效

• 申請號: 201680034524.X
• 申請日: 2016-06-23
• 公開（公告）號: CN107810276B
• 公開（公告）日: 2022-09-09
• 發明（設計）人: 皮爾·馬格拉夫-羅加拉;斯文·豪克
• 申請（專利權）人: 茲托視覺有限公司
• 主分類號: C12Q1/6841
• 分類號: C12Q1/6841
• 代理公司: 青島聯智專利商標事務所有限公司 37101
• 代理人: 遲承柏;邵新華

本發明涉及一種鑒定染色體畸變，特別是染色體結構和/或數目畸變，且優選染色體結構畸變的方法，所述方法是利用原位雜交，通過檢測生物樣品中，優選一個或多個細胞中和/或一個或多個細胞核中的染色體和/或DNA區域。

背景技術

本發明涉及染色體異常(chromosome anomalies)或染色體畸變(chromosomeaberrations)檢測方法的技術領域。

具體地，本發明涉及一種通過原位雜交檢測染色體畸變的方法。此外，本發明涉及一種適用于檢測染色體畸變的組合物及其根據本發明的用途。本發明的另一個目的為提供標記有檢測標記的位點特異性雜交探針的應用。最后，本發明的一個目的是提供一種用于檢測染色體畸變的試劑盒。

許多腫瘤疾病是基于染色體結構和數目變異，如易位、倒位、片段重復、缺失、插入、復制、非整倍體和擴增。這些變化的檢測作為預測、預后或鑒別診斷指標，通常通過原位雜交(ISH)進行。

原位雜交是基于核酸單鏈特別是DNA單鏈的互補堿基的雜交或配對，使得樣品中特別是組織或細胞制劑中的特異性核酸序列可被檢測。為此目的，將直接或間接標記的合成產生的探針與樣品的核酸單鏈雜交并隨后檢測。

為了檢測目的，可以使用熒光標記的核酸片段或熒光標記的雜交探針(熒光ISH(FISH))。此外，可以使用抗原標記的探針，特別是半抗原標記的探針，其隨后利用抗體通過顯色反應可見，使得光學顯微鏡分析可以進行((亮場ISH(BrISH))、顯色ISH(CISH)、銀ISH(SISH))。

FISH的優點為可以同時檢測多個基因組區域，以便彼此區分。為此目的，針對不同基因組區域或對其特異的核酸片段由不同的熒光染料進行標記或偶聯，在每種情況下，每種熒光染料在吸附光譜和/或發射光譜方面彼此不同。如果這種包含分離的不同單個探針的多色探針用于中期染色體制劑或間期細胞核制劑，可以通過使用特定的顯微鏡濾光片來分別描繪各個顏色，其將精確定義的光波長范圍導入制劑以激發染料，并且還將由染料發射的精確定義的光波長范圍導入評估器(稱為單帶通濾波器組)。此外，還存在允許同時描繪不同熒光染料和由此描述多個核酸片段的濾波器和濾波器組。在兩種不同的熒光染料的情況下，例如，一種稱為雙帶通濾波器組。

然而，由于每個特定探針檢測的每個基因組區域只能使用一個標記，對于同時描述設置了明確的限定。此外，染料的吸收和發射范圍通常彼此靠近，使得它們不能通過顯微鏡過濾器組彼此分離。由于這些原因，通常在FISH中僅同時分析兩種顏色(橙色/紅色和綠色)或三種顏色(橙色/紅色和綠色同時或與藍色核反顏色(DAPI)一起)。與FISH可以描述的大致相同的限定也適用于BrISH。這里，現有技術的狀態為使用通常選自生物素、二硝基苯(DNP)和地高辛組的兩種半抗原，以及兩種抗體偶聯的酶，通常為堿性磷酸酶和過氧化物酶。

所述同時描述或分析的限制對于用于檢測染色體結構和數目畸變的探針的組成(組成)或配位有決定性的影響，其可用于診斷細胞位于間期的腫瘤，僅用所謂的位點特異性探針進行，其中有時，所謂的重復序列探針也被用于檢測染色體數目突變。

位點特異性探針被認為是處理染色體中選定DNA片段的探針，并被稱為基因特異探針或“單拷貝”探針，所述DNA片段通常為單個基因或相鄰基因，大小總共高達約1000kb。重復序列特異性探針是處理重復序列并因此處理大小為多個1000kb的區域的探針。例如，這些探針還包括著絲粒探針或α-衛星探針。

關于易位和倒位的檢測，基本上有兩種決定性的技術和潛在的探針組成或探針組成：一方面，融合信號(稱為雙色雙融合方法)(WO 02/093130 A2)的發生及另一方面融合信號的分離(稱為雙色-斷裂-分離或雙色分離方法)的原理。在以下這兩個原理的表示和衍生信號模式中，必須注意的是，正常細胞通常是二倍體，即每個等位基因重復存在。由于通常兩個等位基因中只有一個受到異常的影響，所以在各種情況下，不受異常影響的等位基因的正常信號與異常信號一起也是可見的。為了更好地理解，正常信號的信號圖像在下文中不會總是被明確描述。