[發(fā)明專利]具有內(nèi)部蛋白質(zhì)銜接子的納米孔

有效

• 申請?zhí)枺?/td>: 201680034399.2
• 申請日: 2016-04-14
• 公開（公告）號: CN107735686B
• 公開（公告）日: 2021-06-11
• 發(fā)明（設(shè)計）人: G·馬格利亞;M·索斯堪;A·別斯曼斯;V·范米維爾特;B·珀爾曼;G·舒爾曼-沃爾特斯
• 申請（專利權(quán)）人: 魯汶天主教大學(xué);格羅寧根大學(xué)
• 主分類號: G01N33/68
• 分類號: G01N33/68;G01N33/487
• 代理公司: 上海專利商標(biāo)事務(wù)所有限公司 31100
• 代理人: 余穎;陳揚揚

1.一種檢測樣品中的配體的方法，其包括步驟：

a)獲得含有納米孔和內(nèi)化于納米孔內(nèi)腔的蛋白質(zhì)銜接子的納米孔傳感器，其中所述蛋白質(zhì)銜接子是能夠結(jié)合配體的功能性酶，并且所述蛋白質(zhì)銜接子在不使用共價化學(xué)或其它固定化技術(shù)的情況下保持內(nèi)化于所述納米孔的內(nèi)腔之中，并且其中所述納米孔具有第一和第二開口，其中第一開口具有比第二開口更寬的直徑，并且所述納米孔是細(xì)胞溶素A(ClyA)或細(xì)胞溶素A(ClyA)突變體，

b)將含有分析物的樣品加入納米孔的順式側(cè)或反式側(cè)，并且

c)測量貫穿所述納米孔的第一電導(dǎo)變化，其反映所述配體與內(nèi)化的酶銜接子的結(jié)合，并測量貫穿所述納米孔的額外的電導(dǎo)變化，其反映酶動力學(xué)，并且其中所述酶動力學(xué)是所述配體與所述內(nèi)化的酶銜接子的結(jié)合和解離。

2.如權(quán)利要求1所述的方法，其中所述納米孔是細(xì)胞溶素A(ClyA)突變體Gln56Trp。

3.如權(quán)利要求1所述的方法，其中ClyA包含多個亞基，各亞基包含由SEQ IDNO:3表示的氨基酸序列。

4.如權(quán)利要求1所述的方法，其中所述蛋白質(zhì)銜接子是球狀的。

5.如權(quán)利要求1所述的方法，其中所述蛋白質(zhì)銜接子是脫甲基酶或還原酶。

6.如權(quán)利要求5所述的方法，其中所述脫甲基酶是AlkB脫甲基酶，任選地包含Asn120Asp突變。

7.如權(quán)利要求5所述的方法，其中所述還原酶是二氫葉酸還原酶。

8.如權(quán)利要求1所述的方法，其中所述蛋白質(zhì)銜接子含有標(biāo)簽，其中所述標(biāo)簽具有總凈正或總凈負(fù)電荷。

9.如權(quán)利要求1所述的方法，其中所述蛋白質(zhì)銜接子與一個或多個其它分子形成復(fù)合物。

10.如權(quán)利要求1所述的方法，其中所述分析物是小分子、蛋白質(zhì)、或核酸。

11.如權(quán)利要求1所述的方法，其中所述分析物是帶電的。

12.一種納米孔傳感器，其含有納米孔和內(nèi)化于納米孔內(nèi)腔的蛋白質(zhì)銜接子，并且所述蛋白質(zhì)銜接子在不使用共價化學(xué)或其它固定化技術(shù)的情況下保持內(nèi)化于所述納米孔的內(nèi)腔之中，其中所述蛋白質(zhì)銜接子是功能性酶，其能夠在所述功能性酶內(nèi)化時結(jié)合配體，并且其中所述納米孔具有第一和第二開口，其中第一開口具有比第二開口更寬的直徑，并且所述納米孔是細(xì)胞溶素A(ClyA)或細(xì)胞溶素A(ClyA)突變體，并且其中所述傳感器配制為測量貫穿所述納米孔的第一電導(dǎo)變化，其反映所述配體與內(nèi)化的酶銜接子的結(jié)合，并測量貫穿所述納米孔的額外的電導(dǎo)變化，其反映酶動力學(xué)，并且其中所述酶動力學(xué)是所述配體與所述內(nèi)化的酶銜接子的結(jié)合和解離。

13.根據(jù)權(quán)利要求12所述的納米孔傳感器的用途，用于檢測樣品中的分析物。