[發明專利]用檸康酸酐滅活微生物的方法

有效

• 申請號: 201680030692.1
• 申請日: 2016-05-24
• 公開（公告）號: CN107636164B
• 公開（公告）日: 2022-02-18
• 發明（設計）人: E.菲斯
• 申請（專利權）人: 豪夫邁·羅氏有限公司
• 主分類號: C12Q1/6844
• 分類號: C12Q1/6844;C12Q1/6806
• 代理公司: 中國專利代理(香港)有限公司 72001
• 代理人: 梁謀;黃希貴

本發明提供了滅活微生物、制備和使用它們的方法、以及含有它們的組合物和試劑盒。所述滅活微生物可用在內部對照試劑的制劑中，所述內部對照試劑用于重組核酸技術、特別是(例如，通過聚合酶鏈式反應(PCR)的)核酸擴增中。

技術領域

本發明提供了包含滅活微生物的物質組合物，所述滅活微生物適合在核酸擴增檢測方法中用作對照。

背景技術

可靠的陽性對照是分子診斷試驗(特別是使用核酸擴增來檢測微生物的那些試驗)的重要組分。例如，可靠的陽性對照為微生物在疑似含有所述微生物的患者樣品中的陰性檢測結果的準確度提供置信度。這樣的對照可以是“內部對照”或“IC”，其加入進行平行試驗以擴增和/或檢測對照核酸靶序列的一部分樣品中，而所述樣品的另一部分針對要通過測定檢測的靶分析物核酸序列的擴增和/或檢測進行分析。通常在對照靶核酸序列和分析物核酸序列都在相同反應容器中純化、擴增和/或檢測的情況下使用“內部對照”(參見，例如，美國專利號7,718,402)。全過程內部對照(即，測定的所有步驟的對照，所述步驟包括樣品處理、核酸提取、擴增、檢測等)是利用核酸擴增的診斷試驗的重要組分。在將微生物用作全過程內部對照的情況下，非常合乎需要的是(如果沒有要求遵守某些管理指南)非傳染性的(參見，例如，WO 2002/033129；美國2002-0076773 A1)。

某些化合物已經被用于可逆地滅活熱穩定的聚合酶，包括甲醛、二羧酸酸酐和檸康酸酐(參見，例如，美國專利號6,183,998; 6,479,264；和7,972,830)。需要包含滅活微生物的新物質組合物以及制備和使用它們的方法。本發明提供了在保留靶核酸序列的完整性的同時用檸康酸酐滅活含有靶核酸序列的微生物的方法，以及使用這樣的方法制備的滅活微生物。

發明內容

本發明提供了滅活微生物、制備和使用它們的方法、以及含有它們的組合物和試劑盒。所述滅活微生物可用在內部對照試劑的制劑中，所述內部對照試劑用在重組核酸技術、特別是(例如，通過聚合酶鏈式反應(PCR)的)核酸擴增中。

在一個方面，本發明提供了微生物的外源滅活方法。在一個實施方案中，所述方法包括使傳染性微生物與檸康酸酐外源地接觸。在某些實施方案中，所述微生物包含對照核酸序列。在某些實施方案中，所述檸康酸酐是有效量的檸康酸酐。在某些實施方案中，與所述微生物的接觸在保留對照核酸序列的完整性的同時滅活所述微生物。在一個實施方案中，提供了微生物的外源滅活方法，所述方法包括使含有對照核酸序列的傳染性微生物與有效量的檸康酸酐外源地接觸，由此在保留對照核酸序列的完整性的同時滅活所述微生物。在某些實施方案中，檸康酸酐的有效量是(i)在約5 mM至約25 mM之間的濃度；(ii)在約5.5 mM至約22 mM之間的濃度，或(iii)在選自約5.5 mM、約11 mM和約22 mM的濃度。在一個實施方案中，所述微生物在接觸步驟之前包含含有至少一個伯胺基團的蛋白質外表面。在另一個實施方案中，所述滅活微生物包含含有至少一個經修飾的伯胺基團的蛋白質外表面。在一個實施方案中，將所述至少一個經修飾的伯胺基團修飾成酰胺鍵和末端羧酸。在某些實施方案中，所述滅活微生物包含蛋白質外表面，所述蛋白質外表面含有至少一個被修飾成酰胺鍵和末端羧酸的伯胺基團。在其它實施方案中，所述接觸步驟在環境溫度進行，和/或所述接觸進行約1小時。在某些實施方案中，所述微生物是病毒，更具體地是RNA或DNA病毒。在其它實施方案中，所述微生物是裝甲的核酸(an armored nucleic acid)，更具體地是裝甲的RNA或DNA。在另一個實施方案中，所述微生物選自病毒、RNA病毒、DNA病毒、裝甲的核酸、裝甲的RNA或DNA、和細菌噬菌體。