[發明專利]表達人特定分子和人Fcγ受體家族的轉基因非人動物

有效

• 申請號: 201680023786.6
• 申請日: 2016-04-28
• 公開（公告）號: CN107529739B
• 公開（公告）日: 2021-01-08
• 發明（設計）人: 鹽田明;溝呂木達也;守時由起
• 申請（專利權）人: 株式會社特殊免疫研究所;國立大學法人秋田大學
• 主分類號: A01K67/027
• 分類號: A01K67/027;C12N15/85;G01N33/50
• 代理公司: 北京安信方達知識產權代理有限公司 11262
• 代理人: 鄭霞

本發明的目的在于提供一種能夠適于針對人特定分子的分子靶向物質或靶向藥物的特性、藥理作用及安全性進行評價的轉基因非人動物，以及該轉基因非人動物的制作方法。本發明的轉基因非人動物被導入有編碼人特定分子的基因和編碼人Fcγ受體家族的基因，并且表達編碼該人特定分子的基因和表達編碼該人Fcγ受體家族的基因。

技術領域

本發明涉及一種表達人的受體、調節因子、抗原等人特定分子與人Fcγ受體家族的轉基因非人動物，以及使用該轉基因非人動物，在體內利用實驗動物(小鼠、大鼠、兔等)對與人特定分子結合的分子靶向物質(例如人嵌合抗體、人源化抗體等)的特性、安全性和治療效果進行評價的方法。

背景技術

近年來，基因工程技術和抗體工程技術取得了輝煌的進步，即能夠制造出以抗體藥物為代表的針對人分子的靶向藥物。但是，當要利用非臨床的動物實驗針對人分子的靶向藥物的藥理作用和安全性進行評價時，即使向不具有作為靶向分子的人抗原的非人動物(例如小鼠、大鼠、兔等)給予以人分子為靶的抗體等分子靶向藥物，也不會產生與給予的分子靶向藥物反應的人抗原，故無法進行適當的評價。因此，在開發人嵌合抗體及人源化抗體等分子靶向藥物時，需要一種事先通過體內動物實驗來評價其安全性和治療效果的方法(非臨床試驗的方法)。

在人類基因組的破譯業已完成的今天，成為抗原的人分子的基因組信息及基因組片段等生物資源能夠很容易地得到，針對作為分子靶向藥物的代表的抗體藥物，正以數百的數量級進行著開發，展開著激烈的競爭。作為現有的抗體藥物原料的單克隆抗體，其對抗原(靶向分子)的特異性高，生物體內的穩定性也高，毒性低，生產方法也具有通用性并較為容易。另外，一旦獲得特異性和結合活性優異的抗體，便可進行各種修飾增強活性。但是，由于其臨床效果未必充足，給予量也較多，因此會產生需要高昂的藥劑費用的問題。關于其原因，列舉有：沒有能夠在體內針對人的抗原的抗體功能進行評價的適合的動物模型，無法通過使用疾病模型的非臨床試驗來評價藥劑。為了解決這種問題，需要使用適合的動物模型進行評價的方法，而在該方法中，必須制作用于在體內評價以抗體為代表的分子靶向藥物的功能的動物模型。

在日本厚生勞動省藥品食品局下發的關于“生物技術應用藥物的非臨床安全性評價”(2012年3月23日日本藥食審查發0323第1號)(非專利文獻1)的第1部3.非臨床安全性實驗3.3動物種類/模型的選擇中，記載有“用于單克隆抗體實驗的適合的動物種類是能表達所預期的抗原表位并能顯示其與人體組織具有類似的組織交叉反應性的動物種類”，以及“如果無適合的動物種類，則應考慮使用表達人源受體的轉基因動物或使用對該動物而言相同的蛋白等”，體現出利用轉基因動物的想法。此外，還記述有“使用表達人源受體的轉基因動物模型而獲得的信息是最有效的”。另一方面，雖然也體現出利用使用獼猴等非人靈長類的評價方法的想法，因其具有與上述后者的人抗原類似的相同蛋白(抗原同源)，但使用非人靈長類的試驗從倫理和/或動物保護的觀點來看，不僅動物實驗受到非常嚴格的限制，而且成本非常高昂，不易采用。所以，需要使用不同的轉基因動物的評價方法。

因此，報道有很多為了用于抗體醫藥開發，制作通過小鼠表達單克隆抗體識別的人的抗原及受體等的轉基因小鼠。另一方面，當利用小型的質粒型的表達載體進行基因導入時，導入基因的預期表達量及導入基因的原本的精密表達調控難以在制作的轉基因小鼠中得到重現。因此，報道有將同時包含編碼人抗原及人受體等的基因和該基因的表達調控序列的來源于人類基因組的巨大DNA片段用作表達載體(BAC表達載體)導入受精卵而制作的轉基因小鼠等，通過該方法制作表達人CD20的轉基因小鼠(專利文獻1、非專利文獻2)。這種轉基因小鼠在血液、骨髓、脾臟、淋巴結和派爾集合淋巴結的成熟細胞、前B細胞和未成熟細胞內表達CD20，人CD20在這些細胞內的表達水平為CD20在人細胞內的表達水平的約40％(專利文獻1)。另外，人CD20B在轉基因小鼠的脾臟及B細胞內的表達水平與在人體內的表達水平相比要低1～7倍(非專利文獻2)。此外，作為重現人免疫系統的非人動物，報道有改變基因組以共同表達人CD16與其輔助分子的敲入小鼠(專利文獻2)。報道有使用如此制作的表達人抗原的轉基因小鼠，即使在體內，針對人抗原的抗體也會顯示藥理活性(非專利文獻2、非專利文獻3)。