[發明專利]通過對選擇性剪接進行適體介導的調節來實現的基因表達調控

有效

• 申請號: 201680020102.7
• 申請日: 2016-02-02
• 公開（公告）號: CN107849563B
• 公開（公告）日: 2021-10-19
• 發明（設計）人: A.R.博伊奈;F.O.達諾斯;J.M.沃勒斯;郭雪翠
• 申請（專利權）人: 梅里特斯英國第二有限公司
• 主分類號: C12N15/11
• 分類號: C12N15/11;C12N15/63;C12N15/85
• 代理公司: 中國專利代理(香港)有限公司 72001
• 代理人: 李唐;黃希貴

1.一種用于調控靶基因的表達的多核苷酸盒，所述多核苷酸盒包含：

a.核糖開關；

b.選擇性剪接的外顯子，所述選擇性剪接的外顯子側接5′內含子和3′內含子，

其中所述核糖開關包含(i)效應區，所述效應區包含莖部，所述莖部包括所述3′內含子的5′剪接位點序列，其中所述效應區莖部的長度為7至20個堿基對；以及(ii)適體，

其中所述選擇性剪接的外顯子包含終止密碼子，所述終止密碼子在所述選擇性剪接的外顯子被剪接至所述靶基因mRNA中時與所述靶基因同框。

2.如權利要求1所述的多核苷酸盒，其中所述適體結合小分子配體。

3.如權利要求1所述的多核苷酸盒，其中所述5′和3′內含子衍生自來自所述靶基因的內源性內含子。

4.如權利要求1所述的多核苷酸盒，其中所述5′和3′內含子對所述靶基因來說為外源性的。

5.如權利要求1所述的多核苷酸盒，其中所述5′和3′內含子衍生自人類β-球蛋白基因的內含子2。

6.如權利要求1所述的多核苷酸盒，其中所述5′內含子包含與所述靶基因同框的終止密碼子。

7.如權利要求1所述的多核苷酸盒，其中所述5′和3′內含子的長度各自獨立地為50至300個核苷酸。

8.如權利要求1所述的多核苷酸盒，其中所述5′和3′內含子的長度各自獨立地為125至240個核苷酸。

9.如權利要求1所述的多核苷酸盒，其中所述效應區莖部的長度為8至11個堿基對。

10.如權利要求1所述的多核苷酸盒，其中所述選擇性剪接的外顯子衍生自由以下組成的組：人類二氫葉酸還原酶基因的外顯子2、突變體人類維爾姆斯瘤1外顯子5、小鼠鈣/鈣調蛋白依賴性蛋白激酶IIδ外顯子16或SIRT1外顯子6。

11.如權利要求1所述的多核苷酸盒，其中所述選擇性剪接的外顯子為來自SEQ ID NO:15的人類DHFR的已修飾外顯子2。

12.如權利要求1所述的多核苷酸盒，其中所述選擇性剪接的外顯子為合成的。

13.如權利要求1所述的多核苷酸盒，其中已通過由以下組成的組中的一項或多項對所述選擇性剪接的外顯子進行了修飾：改變外顯子剪接增強子的序列、改變外顯子剪接沉默子的序列、添加外顯子剪接增強子以及添加外顯子剪接沉默子。

14.權利要求1至13任一項所述的多核苷酸盒在制備用于通過如下方法調節靶基因的表達的藥物中的用途，所述方法包括：

a.將所述的多核苷酸盒插入靶基因中，

b.將包含所述多核苷酸盒的所述靶基因引入細胞中，以及

c.使所述細胞暴露于小分子配體，所述小分子配體以有效誘導所述靶基因的表達的量特異性結合所述適體。

15.如權利要求14所述的用途，其中將所述多核苷酸盒插入所述靶基因的蛋白質編碼區中。

16.如權利要求14所述的用途，其中當所述小分子配體存在時所述靶基因的所述表達比所述小分子配體不存在時的表達水平高5倍以上。

17.如權利要求14所述的用途，其中當所述小分子配體存在時所述靶基因的所述表達比所述小分子配體不存在時的表達水平高10倍以上。

18.如權利要求14所述的用途，其中將兩個或更多個所述多核苷酸盒插入所述靶基因中。