[發明專利]L-巖藻糖的生物催化生產方法

有效

• 申請號: 201680018062.2
• 申請日: 2016-02-19
• 公開（公告）號: CN107454915B
• 公開（公告）日: 2022-03-22
• 發明（設計）人: V·納維茨卡斯;M·布羅伊爾;M·普爾;M·魏因加藤;K-U·鮑爾代紐斯;W·塞格爾
• 申請（專利權）人: 巴斯夫歐洲公司
• 主分類號: C12P19/02
• 分類號: C12P19/02;C12N9/04
• 代理公司: 北京市中咨律師事務所 11247
• 代理人: 陳潤杰;黃革生

1.用于生產L-巖藻糖的方法，包括下列步驟：

(a)提供L-巖藻糖醇，

(b)提供酶種類EC 1.1.3.9的半乳糖氧化酶、過氧化物酶和過氧化氫酶，

(c)采用所述半乳糖氧化酶、過氧化物酶和過氧化氫酶氧化L-巖藻糖醇，并且在允許L-巖藻糖醇生物催化氧化成L-巖藻糖的條件下，對得到的混合物進行溫育，

(d)任選地：分離合成的L-巖藻糖。

2.如權利要求1的方法，其中步驟(b)包含下列子步驟：

(b1)提供重組微生物，其用于酶種類EC 1.1.3.9的半乳糖氧化酶的重組表達，其中所述微生物包含編碼半乳糖氧化酶的轉基因，所述半乳糖氧化酶來自肉座菌目的真菌，

(b2)在允許合成半乳糖氧化酶的條件下培養所述重組微生物，

(b3)任選地：分離合成的半乳糖氧化酶。

3.如權利要求2的方法，中所述重組微生物選自：大腸桿菌菌種，芽孢桿菌屬菌種，其中所述重組微生物表達編碼半乳糖氧化酶的轉基因和任選的、編碼過氧化物酶和/或過氧化氫酶的轉基因。

4.如權利要求3的方法，其中所述重組微生物選自大腸桿菌BL21、大腸桿菌MG1655或大腸桿菌W3110，或地衣芽孢桿菌、枯草芽孢桿菌或解淀粉芽孢桿菌，其中所述重組微生物表達編碼半乳糖氧化酶的轉基因和任選的、編碼過氧化物酶和/或過氧化氫酶的轉基因。

5.如權利要求1的方法，其中步驟(b)包含下列子步驟：

(b1)提供重組微生物，其用于酶種類EC 1.1.3.9的半乳糖氧化酶的重組表達，其中所述微生物包含編碼半乳糖氧化酶的轉基因，其中所述半乳糖氧化酶來自鐮刀菌屬的真菌，

(b2)在允許合成半乳糖氧化酶的條件下培養所述重組微生物，

(b3)任選地：分離合成的半乳糖氧化酶。

6.如權利要求5的方法，其中所述轉基因編碼半乳糖氧化酶，所述半乳糖氧化酶來自尖孢鐮菌。

7.如權利要求5的方法，中所述重組微生物選自：大腸桿菌菌種，芽孢桿菌屬菌種，其中所述重組微生物表達編碼半乳糖氧化酶的轉基因和任選的、編碼過氧化物酶和/或過氧化氫酶的轉基因。

8.如權利要求7的方法，其中所述重組微生物選自大腸桿菌BL21、大腸桿菌MG1655或大腸桿菌W3110，或地衣芽孢桿菌、枯草芽孢桿菌或解淀粉芽孢桿菌，其中所述重組微生物表達編碼半乳糖氧化酶的轉基因和任選的、編碼過氧化物酶和/或過氧化氫酶的轉基因。

9.如權利要求1至8任一項的方法，其中所述過氧化物酶選自酶種類EC 1.11.1.7的過氧化物酶。

10.如權利要求1至8任一項的方法，其中所述過氧化氫酶選自酶種類EC 1.11.1.6的過氧化氫酶。

11.如權利要求1至8任一項的方法，其中在步驟(c)中的溫育開始時L-巖藻糖醇在混合物中的濃度為1-500g/L。

12.如權利要求1至8任一項的方法，其中在步驟(c)中的溫育開始時半乳糖氧化酶在混合物中的濃度為0.005-6.25g/L。

13.如權利要求1至8任一項的方法，其中在步驟(c)中的溫育開始時過氧化物酶在混合物中的濃度為0-0.5g/L。

14.如權利要求1至8任一項的方法，其中在步驟(c)中的溫育開始時過氧化氫酶在混合物中的濃度為0-0.4g/L。

15.如權利要求3中所定義的重組微生物在權利要求1-4和9-14任一項的方法中的用途。