[發明專利]非免疫原性單結構域抗體

在審

• 申請號: 201680017175.0
• 申請日: 2016-01-21
• 公開（公告）號: CN107531777A
• 公開（公告）日: 2018-01-02
• 發明（設計）人: B.P.埃克爾曼;J.C.蒂默;Q.德弗勞瓦
• 申請（專利權）人: 英伊布里克斯有限合伙公司
• 主分類號: C07K16/00
• 分類號: C07K16/00;C07K16/42
• 代理公司: 中國專利代理(香港)有限公司72001
• 代理人: 梁謀,羅文鋒

相關申請

本申請要求于2015年1月21日提交的美國臨時申請號62/106,035的權益，所述美國臨時申請的內容通過引用以其整體并入本文。

發明領域

本發明一般地涉及在人或人源化單結構域抗體片段（sdAb）內的修飾，所述修飾阻止通過預先存在的抗體的識別，涉及包括這些修飾的經分離的多肽及其方法和用途。

序列表的引入

于2016年1月20日創建且大小為10.0 KB的名稱為“INHI018001WO_ST25”的文本文件的內容，通過引用以其整體并入本文。

發明背景

生物治療劑的臨床免疫原性可以限制功效并且促成不利事件。細胞和體液免疫原性兩者在臨床環境中都可以是有問題的。衍生自非人來源的抗體中最常觀察到的免疫原性或其威脅已導致廣泛的蛋白質工程和平臺創新，以減輕潛在的免疫原性。這些包括人源化、人工程化（humaneering）、貼面化（veneering）和全人抗體平臺的開發。然而，即使全人抗體和抗體片段也具有免疫原性的風險。免疫原性通常指向抗體的CDR區。相反，也觀察到構架區定向的免疫原性，如單結構域抗體的情況。已注意到相當一部分人具有預先存在的針對單結構域抗體內的隱蔽表位的抗體。因此，存在生成非免疫原性單結構域抗體的需要。

發明概述

本發明的經修飾的單結構域抗體（sdAb）片段可以衍生自許多來源，包括但不限于V_HH、V_NAR、工程化V_H或V_K結構域。V_HH可以由僅駱駝科重鏈抗體及其文庫生成。V_NAR可以由僅軟骨魚類重鏈抗體及其文庫生成。已實施了從常規異源二聚體V_H和V_K結構域生成單體sdAb的各種方法，包括界面工程和特定種系家族的選擇。在優選的實施方案中，本發明的經修飾的sdAb是人或人源化的。

預先存在的抗人單結構域抗體（sdAb）抗體（ASDA）最普遍以這樣的形式觀察到，其中sdAb被定位使得其具有游離羧基末端。本發明提供了在人或人源化sdAb區域內的突變，所述突變使ASDA識別失效。在本發明的一些實施方案中，sdAb在構架1區（FW1）內被改變或修飾。在其他實施方案中，sdAb在構架2區（FW2）內被改變或修飾。在其他實施方案中，sdAb在構架3區（FW3）內被改變或修飾。在其他實施方案中，sdAb在構架4區（FW4）內被改變或修飾。這些修飾包括突變、截短、延伸或其組合。在一些實施方案中，sdAb在單個區域內被修飾。在其他實施方案中，sdAb在多于一個區域處被修飾。例如，sdAb可以在構架1和構架4內被修飾。本發明的sdAb修飾使ASDA識別失效，而不顯著降低蛋白質的結合親和力、特異性、表達能力或穩定性。本文使用的所有編號均指Kabat編號。

下文顯示了與人VH羧基末端殘基（Leu/Thr108、Val109、Thr110、Val111、Ser112、Ser113；LVTVSS）比對的sdAb的構架4的示例性修飾：

108 LVTVSS 113（天然人VH序列，SEQ ID NO: 58）

108 LVEIK 112（SEQ ID NO: 1）

108 LVTVE 112（SEQ ID NO: 2）

108 LVTVSE 113（SEQ ID NO: 3）

108 LVTVEG 113（SEQ ID NO: 4）

108 LVTVSEG 114（SEQ ID NO: 5）

108 LVTVK 112（SEQ ID NO: 6）

108 LVTVS 112（SEQ ID NO: 7）

108 LVTVSK 113（SEQ ID NO: 8）

108 LVTVKG 113（SEQ ID NO: 9）

108 LVTVSKG 114（SEQ ID NO: 10）

108 LVTVSKPG 115（SEQ ID: NO 30）

108 LVTVSKPGG 116（SEQ ID: NO 31）

108 LVTVKP 113（SEQ ID: NO 32）