[發(fā)明專利]用于制備用于探測蛋白質(zhì)錯誤折疊病癥的蛋白質(zhì)凝聚物的標(biāo)準(zhǔn)樣品的方法以及標(biāo)準(zhǔn)樣品和其使用

有效

• 申請?zhí)枺?/td>: 201680016415.5
• 申請日: 2016-02-25
• 公開（公告）號: CN107430122B
• 公開（公告）日: 2019-10-11
• 發(fā)明（設(shè)計(jì)）人: M.許爾澤曼;C.扎菲烏;O.班納赫;D.維爾博爾德
• 申請（專利權(quán)）人: 于利奇研究中心有限公司
• 主分類號: G01N33/543
• 分類號: G01N33/543;G01N33/68;G01N33/96
• 代理公司: 中國專利代理(香港)有限公司 72001
• 代理人: 郭帆揚(yáng);萬雪松

本發(fā)明涉及一種用于制備用于探測蛋白質(zhì)錯誤折疊病癥的蛋白質(zhì)凝聚物的標(biāo)準(zhǔn)樣品，帶有如下步驟：A)提供帶有蛋白質(zhì)錯誤折疊病癥的凝聚物大小的無機(jī)納米顆粒，B)在納米顆粒表面處形成游離的氨基或游離的羧基，(以用于使納米顆粒表面官能化成氨基官能化或羧基官能化的納米顆粒)C)i)將馬來酰亞胺?間隔基?羧酸結(jié)合到步驟B)中的游離氨基中，或者ii)將步驟B)中的游離的羧基轉(zhuǎn)變?yōu)镹HS酯，D)將蛋白質(zhì)凝聚物的單體i)經(jīng)由在單體自由端處的氫硫基結(jié)合到馬來酰亞胺?間隔基?羧酸處，或ii)經(jīng)由在單體的自由端處的氨基結(jié)合到NHS酯處。本發(fā)明的對象是一種標(biāo)準(zhǔn)樣品以及其在探測在蛋白質(zhì)錯誤折疊病癥的情況中出現(xiàn)的蛋白質(zhì)凝聚物的情形中的使用。

技術(shù)領(lǐng)域

本發(fā)明涉及一種用于制備用于探測蛋白質(zhì)錯誤折疊病癥的蛋白質(zhì)凝聚物的標(biāo)準(zhǔn)樣品的方法以及像這樣的標(biāo)準(zhǔn)樣品和其使用。

背景技術(shù)

概念蛋白質(zhì)錯誤折疊病癥是由于錯誤折疊的、凝聚的蛋白質(zhì)所引起的病癥的綜合概念。醫(yī)學(xué)上尤其相關(guān)的是神經(jīng)退化的病癥例如阿爾茨海默癡呆癥(AD)和帕金森病癥。蛋白質(zhì)錯誤折疊病癥的診斷大多受限于臨床癥狀的分析并且在死后才可通過組織病理學(xué)說地探測蛋白質(zhì)凝聚物提供可靠性。頗有前途的基于生物標(biāo)記的診斷方法直接探測了體液中的病理學(xué)的蛋白質(zhì)凝聚物。該方法不僅必須尤其地靈敏，而且能區(qū)分單體與凝聚的蛋白質(zhì)構(gòu)象。通常該方法涉及所謂的免疫性探測、即涉及經(jīng)由抗原/抗體結(jié)合來分離或檢測蛋白質(zhì)凝聚物。為了將蛋白質(zhì)凝聚物作為生物標(biāo)記定量地來確定，需要在該方法中使用內(nèi)標(biāo)。由公開文獻(xiàn)WO2013/092951 A2已知一種用于量化來自內(nèi)生蛋白質(zhì)的病理學(xué)上的凝聚物或低聚物，其標(biāo)示出蛋白質(zhì)凝聚病癥或或淀粉質(zhì)退化或蛋白質(zhì)錯誤折疊病癥。其特征在于，聚合物由多肽序列構(gòu)成。其在其序列方面在相應(yīng)的部分區(qū)域中與內(nèi)生蛋白質(zhì)相同或者在相應(yīng)的部分區(qū)域上與如下內(nèi)生蛋白質(zhì)具有至少50%的同系現(xiàn)象(Homologie)，即，所述內(nèi)生蛋白質(zhì)標(biāo)示出蛋白質(zhì)凝聚病癥或淀粉質(zhì)退化或蛋白質(zhì)錯誤折疊病癥，其中，聚合物不凝聚?？乖瓫Q定基的數(shù)量由此來確定，即使用在其序列方面與內(nèi)生蛋白質(zhì)的如下部分區(qū)域相同的多肽序列，即，所述部分區(qū)域形成抗原決定基或與該部分區(qū)域具有至少50%的同系現(xiàn)象，并且在此具有抗原決定基的生物活性。在構(gòu)建根據(jù)本發(fā)明的標(biāo)準(zhǔn)樣品的情況中將如此選出的多肽序列以期望的數(shù)量裝入和/或根據(jù)本發(fā)明相互接合。該標(biāo)準(zhǔn)樣品適用于確定病理學(xué)凝聚物或低聚物的實(shí)際數(shù)量。

缺點(diǎn)是，該標(biāo)準(zhǔn)樣品僅可受限地使用。

此外，凝聚物標(biāo)準(zhǔn)樣品可由重組的或合成的Aβ來制備。在此，在適合的緩沖劑環(huán)境下誘導(dǎo)出Aβ的凝聚。于是，不同的凝聚物種(Aggregatspezies)可經(jīng)由特定的離心分離技術(shù)或色層分離技術(shù)來提純。此外為了使凝聚物穩(wěn)定化，可附加地提供用于化學(xué)橫向交聯(lián)的方法，例如所謂的GraFix-法(Kastner等人，2008，Stark 2010)。

因此缺點(diǎn)是，至今所有用于確定在蛋白質(zhì)錯誤折疊病癥中出現(xiàn)的病理學(xué)的蛋白質(zhì)凝聚物和低聚物的標(biāo)準(zhǔn)樣品僅可受限地使用。

發(fā)明內(nèi)容

本發(fā)明的任務(wù)在于提供一種標(biāo)準(zhǔn)樣品，其不具有現(xiàn)有技術(shù)的缺點(diǎn)并且可長期使用且可尤其廣泛地用作用于探測不同的蛋白質(zhì)錯誤折疊病癥的標(biāo)準(zhǔn)樣品。本發(fā)明的另一任務(wù)在于提供一種用于制備該標(biāo)準(zhǔn)樣品的方法并且說明該標(biāo)準(zhǔn)樣品的有利的使用。

本發(fā)明的任務(wù)利用根據(jù)獨(dú)立權(quán)利要求的用于制備標(biāo)準(zhǔn)樣品的方法、根據(jù)并列權(quán)利要求的標(biāo)準(zhǔn)樣品本身以及該標(biāo)準(zhǔn)樣品的使用來解決。有利的設(shè)計(jì)方案由從屬權(quán)利要求得出。

根據(jù)本發(fā)明的用于制備用于探測蛋白質(zhì)錯誤折疊病癥的蛋白質(zhì)凝聚物的標(biāo)準(zhǔn)樣品的方法具有以下步驟：

A)提供帶有蛋白質(zhì)錯誤折疊病癥的凝聚物大小的無機(jī)納米顆粒。

B)在納米顆粒表面形成游離的氨基或游離的羧基，(以用于將納米顆粒表面官能化成氨基官能化或羧基官能化的納米顆粒)。

C) i)將馬來酰亞胺-間隔基-羧酸結(jié)合到步驟B)中的游離的氨基處，或