[發明專利]包含源于正分化成軟骨細胞之干細胞的外排體的用于軟骨細胞分化誘導或軟骨組織再生的組合物

有效

• 申請號: 201680008522.3
• 申請日: 2016-02-04
• 公開（公告）號: CN107223153B
• 公開（公告）日: 2021-08-03
• 發明（設計）人: 趙容佑;崔志淑;禹昌希;崔榮贊;趙洞奎
• 申請（專利權）人: 胞外體干細胞株式會社
• 主分類號: C12N5/077
• 分類號: C12N5/077;C12N5/074;C12N5/0775;A61K35/28;A61K35/32;A61K35/51;A61K9/08;A61K47/36;A61P19/08
• 代理公司: 北京集佳知識產權代理有限公司 11227
• 代理人: 鄭斌;張福譽

本發明涉及用于誘導軟骨細胞分化或使軟骨組織再生的組合物，其包含來源于正分化成軟骨細胞之干細胞的外排體作為活性成分；涉及用于誘導軟骨細胞分化的培養基組合物、用于使軟骨組織再生的注射制劑和用于治療軟骨病癥的藥物組合物，其所有都包含所述組合物；并且涉及用于治療軟骨病癥的方法。根據本發明的一個具體實施方案，用于誘導軟骨細胞分化或軟骨再生的組合物包含來源于正分化成軟骨細胞之干細胞的外排體作為活性因子。在干細胞分化期間分泌的外排體包含與軟骨細胞分化有關的生長因子以及與干細胞增殖和再生有關的基因和蛋白質，并且因此根據所述組合物使受損的軟骨組織再生的誘導是優異的。此外，使用外排體作為細胞源性載劑，所述組合物穩定且快速地將活性物質遞送到細胞中，同時使常規細胞治療劑的副作用最小化。因此，通過借助用于預防和治療軟骨病癥的可注射組合物進行簡單操作可以減輕患者的疼痛，并且在操作之后可以持續且有效地治療軟骨病癥。

技術領域

本發明涉及用于誘導軟骨細胞分化或用于使軟骨組織再生的組合物。所述組合物可以包含來源于正分化成軟骨細胞的干細胞的外排體作為活性成分。本發明可以包括用于誘導軟骨細胞分化的培養基組合物、用于使軟骨組織再生的注射制劑和用于治療軟骨病癥的藥物組合物，其所有都包含用于誘導軟骨細胞分化或用于使軟骨組織再生的組合物。本發明還可以包括使用所述組合物來治療軟骨病癥的方法。

背景技術

由于軟骨組織的多種特征，當大面積受損時通過自然愈合難以使軟骨組織再生。因此，已經開發了用于治療受損的軟骨組織的技術。例如，已經使用外科手術操作來治療受損的軟骨組織，所述外科手術操作例如人工關節置換操作、關節軟骨的軟骨成形術、微骨折技術等。然而，前述外科手術技術需要形成切口，這有問題地引起瘢痕并且產生耐久性較低的纖維軟骨。因此，即使通過復雜的操作，外科手術技術的治療效果還是不令人滿意。因此，已經開發了使用水凝膠的可注射制劑，其可以采用無需形成大切口的簡單外科手術過程進行遞送，并且產生快速的治療效果。例如，已經開發了使用透明質酸之亞烷基二胺交聯水凝膠用于關節內施用的可注射溶液(參見韓國專利公開號2013-0028012)、包含膠原蛋白和透明質酸用于修復軟骨組織的組合物(參見韓國專利登記號1279812)、包含氯膦酸和透明質酸用于治療骨關節炎的藥物制劑(參見韓國專利公開號2008-0082657)等。然而，盡管這些方法可以暫時減輕疼痛，但是其不足以誘導軟骨組織再生。因此，需要有效地誘導細胞分化以使軟骨組織再生的因素。

目前，用于誘導軟骨組織再生的細胞治療方法包括將體外培養的細胞移植到受損的組織區域。例如，已經開發了使用自體同源軟骨細胞(參見韓國專利公開號2013-0072983)、來源于臍帶的干細胞(參見韓國專利公開號2013-0009651)等的治療方法。然而，使用自體同源軟骨細胞來治療大受損區域的治療方法并不有效。這是因為使用自體同源軟骨細胞的方法包括從患者收獲細胞，培養細胞，并將細胞移植到患者中。另外，由于包括移植外科手術在內患者經歷至少兩次手術，故患者通常遭受身體疼痛和經濟負擔。干細胞治療通常包括使用干細胞(例如臍帶血、脂肪組織、滑膜和肌肉的干細胞)來進行細胞治療。然而，干細胞治療可能導致例如以下問題：在體內移植干細胞之后以低速率分化成軟骨細胞、軟骨細胞由于血管浸潤而鈣化、以及由與細胞肥大有關的基因表達引起的細胞凋亡。由于細胞數量和分化能力根據收集部位而不一致以及細胞表型由于在體外培養期間發生細胞去分化而改變，可能發生干細胞治療的并發癥。

如上所述，常規治療技術利用以下方法：其中將從患者獲得的軟骨細胞或成體干細胞體外培養，分散在水凝膠中，并隨后移植到受損的組織區域。由于細胞是直接注射的，因此可再生為接近正常的軟骨組織。然而，常規治療技術具有一些問題。例如，常規治療技術不可避免地需要進行外科手術操作以獲得細胞。此外，常規治療技術可包括進行困難的體外培養過程，可根據受損組織區域的大小受細胞數量限制，并且可使細胞在體內以低速率分化成軟骨組織。水凝膠分散細胞的一次施用可以暫時減輕疼痛并提高關節的活動性，但是最終難以用單次治療立刻使受損的軟骨組織再生。

為了解決現有技術的問題，本發明人從正分化成軟骨細胞的干細胞只分離外排體并且發現包含該分離外排體的組合物的軟骨再生作用，從而完成本發明。