[發明專利]由核苷酸活化的糖產生游離形式的單糖的發酵方法

有效

• 申請號: 201680006475.9
• 申請日: 2016-01-29
• 公開（公告）號: CN107278232B
• 公開（公告）日: 2022-07-08
• 發明（設計）人: S·詹尼溫;K·帕沙特
• 申請（專利權）人: 科漢森母乳低聚糖股份有限公司
• 主分類號: C12P19/18
• 分類號: C12P19/18;C12P19/02;C12N9/10;C12N1/21;C12N1/19;C12R1/19;C12R1/15;C12R1/145;C12R1/07;C12R1/38;C12R1/225;C12R1/865
• 代理公司: 北京北翔知識產權代理有限公司 11285
• 代理人: 孫占華;姜建成

1.用于使用重組微生物產生游離形式的L-巖藻糖的方法，所述方法包括以下步驟：

a)提供用于合成L-巖藻糖的重組微生物，

所述重組微生物包含能夠在不存在受體分子的情況下催化GDP-L-巖藻糖的水解以從GDP-L-巖藻糖釋放L-巖藻糖的巖藻糖基轉移酶，

所述重組微生物包含編碼巖藻糖基轉移酶的異源核酸，其中巖藻糖基轉移酶為由來自大腸桿菌(Escherichia coli)的如SEQ ID No.3所示的wbgL基因編碼的2-巖藻糖基轉移酶的變體，與由wbgL基因編碼的野生型2-巖藻糖基轉移酶相比，所述變體具有以下氨基酸殘基置換：天冬氨酸69置換為絲氨酸且異亮氨酸268置換為脯氨酸，或者組氨酸124置換為丙氨酸且谷氨酸215置換為甘氨酸；

所述重組微生物被轉化以包含使重組微生物能夠以蔗糖作為唯一碳源來生長的基因；

所述重組微生物被進一步修飾以具有失活的或嚴重減少的或者缺乏導致所產生的L-巖藻糖降解的分解代謝途徑；和

所述重組微生物被進一步修飾以過表達至少一個涉及GDP-L-巖藻糖的生物合成的基因以提高L-巖藻糖的GDP-L-巖藻糖的供應；以及

b)在適于該重組微生物生長的培養基中培養所述重組微生物，其中所述重組微生物不能顯著程度地代謝L-巖藻糖，以便L-巖藻糖在培養步驟期間累積；

其中所述重組微生物為大腸桿菌菌株、棒狀桿菌屬種(Corynebacterium spp.)、梭菌屬種(Clostridium spp.)、芽孢桿菌屬種(Bacillus spp.)、假單胞菌屬種(Pseudomonasspp.)、乳桿菌屬種(Lactobacillus spp.)或酵母屬種(Saccharomyces sp.)菌株。

2.權利要求1的方法，其特征在于所述重組微生物被進一步修飾以具有失活的或嚴重減少的或者缺乏涉及L-巖藻糖分解代謝的基因。

3.權利要求1的方法，其特征在于至少一個涉及GDP-巖藻糖的生物合成的基因被過表達以提高GDP-巖藻糖的供應。

4.權利要求3的方法，其特征在于至少一個基因為異源的或同源的。

5.權利要求1的方法，其特征在于所述重組微生物被進一步修飾以具有失活的或減少的針對GDP-L-巖藻糖的競爭途徑。

6.權利要求1的方法，其特征在于所述重組微生物在包含廉價碳源的培養基中培養，所述碳源選自甘油、蔗糖、葡萄糖、果糖、糖蜜(molasse)、木糖、纖維素、合成氣、玉米糖漿或乳糖。