[發明專利]一種制備煙酰胺單核苷酸的方法

有效

• 申請號: 201680003973.8
• 申請日: 2016-07-30
• 公開（公告）號: CN107889505B
• 公開（公告）日: 2021-05-25
• 發明（設計）人: 傅榮昭;張琦
• 申請（專利權）人: 邦泰生物工程（深圳）有限公司
• 主分類號: C12N15/63
• 分類號: C12N15/63;C12N5/10;C12P19/00;G01N33/573;C07H21/00;A61K31/455
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1.一種制備煙酰胺單核苷酸的方法，其特征在于：以煙酰胺、焦磷酸或其鹽和肌苷酸或其鹽為原料，在煙酰胺磷酸核糖轉移酶、次黃嘌呤磷酸核糖轉移酶以及黃嘌呤氧化酶的催化作用下發生反應，制得煙酰胺單核苷酸；所述煙酰胺磷酸核糖轉移酶的用量為1-100g/L底物溶液，所述次黃嘌呤磷酸核糖轉移酶的用量為1-100g/L底物溶液，所述黃嘌呤氧化酶的用量為1-100g/L底物溶液；所述反應在溫度為30-50℃，pH值為6.5-8.5的條件下進行；所述反應在Mg²⁺、Zn²⁺以及亞硫酸氫鈉存在的條件下進行。

2.根據權利要求1所述的制備煙酰胺單核苷酸的方法，其特征在于：所述反應在Tris-HCl緩沖液中進行。

3.根據權利要求1所述的制備煙酰胺單核苷酸的方法，其特征在于：所述煙酰胺的濃度為1-100mM，所述焦磷酸或其鹽的濃度為1-50mM，所述肌苷酸或其鹽的濃度為1-50mM。

4.根據權利要求1所述的制備煙酰胺單核苷酸的方法，其特征在于：所述原料中煙酰胺、焦磷酸或其鹽、肌苷酸或其鹽的摩爾比為1-3∶1-2∶1。

5.根據權利要求1至4任一項所述的制備煙酰胺單核苷酸的方法，其特征在于所述煙酰胺磷酸核糖轉移酶為在如SEQ ID NO：2所示的氨基酸序列的基礎上突變獲得的以下任意一個突變體：F180A突變體、F180W突變體、A182Y突變體、E231A突變體、E231Q突變體、D298A突變體、D298N突變體、D298E突變體、D338N突變體、D338E突變體、D377A突變體、D377N突變體、D377E突變體、E231Q/D338E突變體、E231Q/D377E突變體、D338E/D377E突變體、E231Q/D338E/D377E突變體以及E231Q/D298A/D338E/D377E突變體。