[發(fā)明專利]圖像差異化多重測定

在審

• 申請?zhí)枺?/td>: 201680002147.1
• 申請日: 2016-06-10
• 公開（公告）號: CN106661532A
• 公開（公告）日: 2017-05-10
• 發(fā)明（設(shè)計(jì)）人: 曹汀;黃勤修;鐘曜光
• 申請（專利權(quán)）人: 博錸生技股份有限公司
• 主分類號: C12M1/34
• 分類號: C12M1/34;G01N33/543
• 代理公司: 廣州華進(jìn)聯(lián)合專利商標(biāo)代理有限公司44224
• 代理人: 何沖

相關(guān)申請的交叉引用

本申請要求2015年6月11日提交的美國臨時(shí)申請序列號62/174,401的優(yōu)先權(quán)權(quán)益，所述臨時(shí)申請以引用的方式整體并入本文。

領(lǐng)域

本文提供用于多重測定中的分析物檢測的編碼的微載體，以及制備和使用所述微載體的方法和與所述微載體相關(guān)的試劑盒。所述微載體使用用于辨識的模擬代碼編碼，并且包括用于捕獲分析物的捕獲劑。

背景

免疫學(xué)測定和分子診斷測定在研究領(lǐng)域和臨床領(lǐng)域中均發(fā)揮關(guān)鍵作用。通常，有必要進(jìn)行一組多個(gè)靶標(biāo)的測定來獲得結(jié)果的有意義或鳥瞰視圖，以有助于研究或臨床決策。這在基因組學(xué)和蛋白質(zhì)組學(xué)的時(shí)代中尤其如此，其中大量的遺傳標(biāo)志物和/或生物標(biāo)志物被認(rèn)為影響或預(yù)測特定疾病狀態(tài)。理論上，多個(gè)靶標(biāo)的測定可通過在不同反應(yīng)容器中并行地或順序地分別測試每個(gè)靶標(biāo)來完成(即，多項(xiàng)單重法(multiple singleplexing))。然而，采用單重法策略的測定不僅通常是繁瑣的，而且它們通常還需要較大樣品體積，特別是當(dāng)待分析的靶標(biāo)數(shù)量較大時(shí)。

多重測定在單個(gè)測定中同時(shí)測量多個(gè)分析物(兩個(gè)或更多個(gè))。多重測定通常用于高通量篩選環(huán)境中，其中可一次分析許多試樣。同時(shí)測定許多分析物和并行測定許多試樣的能力是多重測定的標(biāo)志并且是此類測定已經(jīng)成為從藥物發(fā)現(xiàn)到功能基因組學(xué)到臨床診斷學(xué)的領(lǐng)域中的有力工具的原因。與單重法相比，通過在同一反應(yīng)容器中組合所有靶標(biāo)，所述測定不太繁瑣且更容易執(zhí)行，因?yàn)槊恳粯悠穬H操作一個(gè)反應(yīng)容器。因此，所需的測試樣品的體積可顯著減小，這在樣品(例如，腫瘤組織、腦脊髓液或骨髓)難以大量取得和/或?qū)τ诖罅咳〉脕碚f為侵入性時(shí)尤其重要。同樣重要的是以下事實(shí)，可降低試劑成本并且測定通量顯著增加。

復(fù)雜大分子樣品的許多測定由兩個(gè)步驟組成。在第一步驟中，將能夠特異性地捕獲目標(biāo)大分子的試劑附接至固相表面。這些固定的分子可用于通過諸如雜交(例如，在基于DNA、RNA的測定中)或抗原-抗體相互作用(在免疫測定中)的各種方式從復(fù)雜樣品中捕獲目標(biāo)大分子。在第二步驟中，檢測分子與捕獲分子和靶標(biāo)的復(fù)合物一起孵育并且結(jié)合至所述復(fù)合物，從而發(fā)射信號，如熒光或其他電磁信號。然后通過那些信號的強(qiáng)度來定量靶標(biāo)的量。

多重測定可通過利用多種捕獲劑來進(jìn)行，每種捕獲劑對不同的目標(biāo)大分子具有特異性。在基于芯片的陣列多重測定中，使每種類型的捕獲劑附接至芯片上的預(yù)定位置。通過在對應(yīng)于一種類型的捕獲劑的每個(gè)位置處測量檢測分子的信號來測定復(fù)雜樣品中的多重靶標(biāo)的量。在懸浮陣列多重測定中，微粒或微載體懸浮于測定溶液中。這些微粒或微載體含有可通過微粒/微載體的一個(gè)或多個(gè)元件嵌入、印刷或以其他方式產(chǎn)生的辨識元件。每種類型的捕獲劑被固定至具有相同ID的顆粒，并且從具有特定ID的顆粒表面上的檢測分子發(fā)射的信號反映相應(yīng)靶標(biāo)的量。

用于懸浮陣列多重測定的現(xiàn)有系統(tǒng)在分辨率上受限制。一些多重系統(tǒng)使用利用標(biāo)準(zhǔn)半導(dǎo)體制造技術(shù)印刷在扁平微珠上的數(shù)字條形碼。然而，可由特定數(shù)量的數(shù)字產(chǎn)生的標(biāo)識符的數(shù)量是有限的。增加唯一標(biāo)識符的數(shù)量需要增加條形碼數(shù)字的數(shù)目，從而在已經(jīng)微小的微珠上需要更多的空間用于印刷。另一種類型的多重系統(tǒng)使用顏色編碼，如用獨(dú)特的熒光染料編碼的熒光珠粒。然而，可用于此類熒光系統(tǒng)的唯一標(biāo)識符的數(shù)量由于重疊的激發(fā)/發(fā)射光譜而受到限制，并且辨識誤差可能由(例如)熒光染料的批次間變化而產(chǎn)生。

因此，需要一種模擬編碼的多重測定系統(tǒng)，例如不受諸如數(shù)字條形碼大小或熒光團(tuán)分辨率的限制約束的多重測定系統(tǒng)。這樣一種系統(tǒng)允許幾乎無限的唯一標(biāo)識符并且使由于使用模擬代碼所致(例如，來自重疊光譜或批次間熒光團(tuán)變化)的識別誤差最小化。

出于所有目的，本文所引用的所有出版物、專利和專利申請?zhí)卮艘砸玫姆绞秸w并入。

簡述

為了滿足這種需求，本文尤其提供了用模擬代碼編碼的微載體，所述微載體包括用于捕獲分析物的捕獲劑。這些微載體可用于例如多重測定中，其中每個(gè)微載體包括用于捕獲特定分析物的捕獲劑和用于辨識的模擬代碼。還提供了制備和使用此類微載體的方法，以及與所述方法相關(guān)的試劑盒。