[實用新型]一種快速檢測貓皰疹病毒I型的PCR檢測試劑盒

有效

• 申請號: 201621476911.2
• 申請日: 2016-12-30
• 公開（公告）號: CN206512203U
• 公開（公告）日: 2017-09-22
• 發明（設計）人: 曹振;趙化芬;王彥兵;高振剛;楊雪松
• 申請（專利權）人: 中瑞動檢（北京）生物技術有限公司
• 主分類號: C12M1/34
• 分類號: C12M1/34;C12Q1/68
• 代理公司: 暫無信息
• 代理人: 暫無信息

技術領域

本實用新型涉及病毒檢測領域，特別涉及一種快速檢測貓皰疹病毒I型的PCR檢測試劑盒，適用于貓皰疹病毒I型的流行病學監測、貓皰疹病毒I型的檢測及基因工程技術等領域。

背景技術

貓皰疹病毒1型(Feline herpesvirus type1,FHV1)屬于皰疹病毒科，甲型皰疹病毒亞科，由Crandell和Maurer于1958年首次分離到，是貓傳染性鼻氣管炎的病原。FHV1可引起貓的急性、高度接觸性的上呼吸道感染，發病率很高，可達100％。雖然成年貓感染后大多痊愈，病死率很低，但幼仔貓感染后癥狀嚴重，病死率可達50％，甚至終生帶毒排毒，并可垂直傳播，危害很大。

貓可較好的耐受麻醉和一般手術,手術時能保持正常血壓。在藥品的降壓物質檢查中,貓作為中國藥典規定的實驗動物,越來越多的被用于形覺波剝奪性弱視、食管病等研究。貓作為實驗動物,雖然應用越來越廣泛,但國內目前尚未見有開展貓的檢測。雖然早在1999年,蔣虹等就建立過貓鼻氣管炎病毒血清學檢測方法,2010年劉寶山等、林穎等先后以貓傳染性鼻氣管炎疫苗為模板建立了FHV-1PCR檢測方法,但均沒有推廣開,實驗用貓到目前為止也沒有標準化規定。目前,實驗用貓也多是從商販或收購型飼養場購買,其來源混雜,遺傳、年齡、微生物和寄生蟲等攜帶情況不清,實驗重現性差,結果隱存著未知因素的影響。FHV-1是目前已知最重要的貓呼吸道疾病之一,其發病率和死亡率均較高,嚴重危害貓的健康。

貓在患有幾種主要疾病時的臨床癥狀相似，并常有混合感染，給診斷造成困難。傳統病毒病的診斷需要進行病毒分離，細胞培養，電鏡觀察以及免疫檢測等方法，缺乏對病毒進行快速、準確、敏感的檢測方法。PCR方法具有操作簡單、特異、快速、敏感等優點，正逐步應用于病原微生物的檢測與研究中。鑒于此，本試驗建立了FHV1的快速PCR檢測試劑盒，為臨床檢測提供了保障。

參考文獻:

1、蔣虹,時建東,吳小閑.貓病毒血清學檢測方法的建立及初步應用[J].中國實驗動物學雜志,1999,9(1):39-41.

2、劉寶山,林穎,尹榮煥,等.貓皰疹病毒1型PCR檢測方法的建立[J].畜牧與獸醫,2010,42(1):74-76.

3、林穎,劉寶山,任會軍,等.貓傳染性鼻氣管炎PCR檢測方法的建立[J].現代畜牧獸醫,2010,44(8),71-73.

實用新型內容

為了解決現有技術中存在的問題，本實用新型的目的是提供一種省時省力，特異性和敏感性優異，貓皰疹病毒I型的PCR檢測試劑盒，可用于皰疹病毒I型的早期診斷。該試劑盒的建立和應用對今后開展實驗用貓的檢測工作及實驗用貓標準化研究具有積極的促進作用，同時通過對貓皰疹病毒攜帶情況的檢測，為貓質量控制標準的制定提供參考依據。

為實現上述目的，本實用新型采取的技術方案為：一種快速檢測貓皰疹病毒I型的PCR檢測試劑盒，包括有包裝盒，內襯，在內襯上設有數個定位孔，通過定位孔將試劑管安裝定位其內部，所述試劑管包括并列安裝的：PCR擴增反應液管，陰性對照管、陽性對照管；

優選的，所述的PCR擴增反應液管中包括正向引物、反向引物、dNTPs、耐熱DNA聚合酶、PCR緩沖液和水。

優選的，所述的陰性對照管中陰性對照為無菌ddH₂O；

優選的，所述陰性對照管為紅色，陽性對照管為藍色。

所述的核苷酸序列為：

上游引物為5’-GCGAAGTACCTGGTCAGAGCG-3’；

下游引物為5’-TTGCGTAGTGCGTGAATTAGC-3’

其中，所述的陽性對照為：分離輝瑞妙三多疫苗605株構建的質粒。

所述的陰性對照是蒸餾水。

PCR反應程序為：95℃3min；95℃30s,58℃30s,72℃40s,35Cycle；72℃10min；4℃∞。

判定結果：如果從待檢測的樣品中擴增到了518bp片段，則該檢測樣品含有貓皰疹病毒I型。

本實用新型所述對可能存在于生物樣品中的傳染病病原體進行檢測的試劑盒，對比現有技術的優點在于：

(1)檢測速度快，效率高，可根據需要檢測病原體；

(2)以本實用新型所設計的試劑盒采用PCR檢測方法對FHV1進行檢測，檢測結果均為陽性，而對其他常見貓源性病毒檢測結果均為陰性，具有特異性強、靈敏度高、重復性好等優點。

(3)操作簡單，結果穩定；