[實用新型]簡易型過氧化氫酶活性測定儀

有效

• 申請號: 201621187256.9
• 申請日: 2016-11-04
• 公開（公告）號: CN206497095U
• 公開（公告）日: 2017-09-15
• 發明（設計）人: 彭何歡;俞率成;沈先忠;楚習軍;王金鐸;徐楠;何穎穎
• 申請（專利權）人: 浙江農林大學
• 主分類號: G01N33/00
• 分類號: G01N33/00
• 代理公司: 杭州求是專利事務所有限公司33200
• 代理人: 周烽

技術領域

本實用新型涉及一種化學實驗儀器，具體是用于酶促反應氣體產生量的增減變化、間接顯示酶活性的結構簡單的測定儀。

背景技術

過氧化氫酶活性的測定，一直以來是按過氧化氫與過氧化氫酶在酶促反應中過氧化氫量的減少，用紫外分光光度計240nm波長的紫外光照射，根據吸光度逐漸降低，測出吸光度的變化速度，計算出過氧化氫酶的活性。具體做法是將過氧化氫酶與過氧化氫置于比色皿中，立即將分光光度計也置于比色皿內，開啟光度計、蓋上比色皿的蓋，進行比色測定。這種比色儀在進行測定時，投放過氧化氫酶與投放過氧化氫幾乎是同時進行的，因酶促反應中的酶具有高效性，兩者一旦混合，反應就開始，過氧化氫的反應損耗也已經產生，即使立即投放分光光度計、開始實測，還是無法反映出這時間差中過氧化氫的損耗量，所測數據不甚準確，誤差較大。本實用新型是將過氧化氫酶與過氧化氫反應中氧氣產生量的增減來反映過氧化氫酶的活性，反應與實測同步進行，既沒有時間差，又能顯示出整個反應的全貌，為此，設計出一種專用的測定儀和介紹其配套的使用方法。我校學生俞率成申請的CN201620610666.3“過氧化氫酶活性測定儀”介紹了相同用處、相似功能的測定儀，但其結構較復雜，操作稍煩些，制作成本較高，推廣和應用前景不甚理想。

實用新型內容

本實用新型要解決的技術問題是提供一種在酶促反應中將過氧化氫的減量改為氧氣的增量來反映過氧化氫酶的活性，能使反應與實測同步進行且誤差小的一種簡易型過氧化氫酶活性測定儀。

解決上述技術問題采用如下技術方案：本簡易型過氧化氫酶活性測定儀，圓筒形的反應筒上部有內襯密封圈或片的蓋，蓋上有帶有啟閉閥的氣液進管，蓋上還有氣體檢測儀插孔，反應筒的底部有帶啟閉閥的放液管，上述兩管與孔側均安裝有密封圈。

所述的蓋上帶有啟閉閥的氣液進管有一條或兩條。

所述的反應筒的底為錐形底，放液管安裝在錐尖部。

所述的反應筒底部安裝有支架。

本實用新型的有益效果是：本測定儀能使反應與實測同步進行，所測數據，能反映出整個反應的全貌，精度高、誤差小，且提供了一種結構簡單、使用方便的酶活性測定新儀器。

附圖說明

附圖為本簡易型測定儀結構示意圖。

具體實施方式

本實用新型下面結合實施例并參照附圖予以詳述：參見附圖，本簡易型過氧化氫酶活性測定儀，圓筒形的反應筒5上部有內襯密封圈或片的蓋1，蓋上有帶有啟閉閥4的氣液進管3，蓋上還有氣體檢測儀插孔2，反應筒的底部有帶啟閉閥的放液管7，上述兩管與孔側均安裝有密封圈。

所述的蓋上帶有啟閉閥的氣液進管有一條或兩條。

所述的反應筒的底為錐形底，放液管安裝在錐尖部。

所述的反應筒5底部安裝有支架6。

使用時，將反應筒底部的放液管7的啟閉閥關閉、將氣體檢測儀插孔2與氣體檢測儀連接，開啟氣液進管3上的閥門，此時，記錄反應筒內原始的氧氣含量。再從氣液進管3分別或先后向反應筒5內加入經計量的過氧化氫液和經計量的過氧化氫酶液，加入量的快慢可通過閥門開啟的大小來控制，最后關閉其閥門，兩液便在反應筒底部進行酶促反應，不斷地、逐步地消耗過氧化氫的同時，產生著氧氣，分時間段分別讀取并記錄氧氣的增量，直至反應結束，畫出不同時間段的氧氣含量變化曲線，根據公式計算出過氧化氫酶的活性。作為過氧化氫酶的活性測定是要求反應一旦開始應快速，則宜采用開大啟閉閥的閥門，快速放液的方法。在反應開始之初，氧氣產生量較大，曲線斜率也大，反映酶的活性最好。

過氧化氫酶活性的計算公式為：

過氧化氫酶活性(U·μmol·min^-1·g^-1)＝(2×ΔO₂×V_T)/(W×V_S×t)；

以每分鐘內氧氣增加的物質的量的2倍的酶量為1個酶活單位(U)；

式中：ΔO₂為待測過氧化氫酶溶液的放氧曲線的直線部分的氧氣增加量(μmol)，V_T為提取酶液總體積(mL)，V_S為測定時取用酶液體積(mL)，W為生物材料鮮重(g)，t為待測過氧化氫酶溶液的放氧曲線的直線部分所消耗的時間(min)。

本測定儀的氣體檢測儀可選用深圳市逸云天電子有限公司生產和銷售的MS600型便攜式六合一氣體檢測儀。本測定儀可用玻璃、塑料和不銹鋼材料制作。其中的“氣液進管3有一條或兩條”，當只有一條時，過氧化氫酶液與過氧化氫液可一前一后地加，兩條時上述兩液可分管先后加入，加畢即關閥；還應說明的是反應筒5容積應足夠大，應能滿足計劃設計中產氣量對反應筒的容量要求，以免內壓過高引起漏氣或炸裂。