[實用新型]一種聯合定量檢測卡

有效

• 申請號: 201620955410.6
• 申請日: 2016-08-26
• 公開（公告）號: CN206497126U
• 公開（公告）日: 2017-09-15
• 發明（設計）人: 周輝
• 申請（專利權）人: 周輝
• 主分類號: G01N33/74
• 分類號: G01N33/74;G01N33/543
• 代理公司: 蕪湖安匯知識產權代理有限公司34107
• 代理人: 項磊

技術領域

本實用新型涉及微流控技術和免疫熒光技術相結合的技術領域，具體涉及一種聯合定量檢測卡。

背景技術

近年來因自身免疫障礙而導致的不孕問題越發引起人們的重視，抗精子抗體(AsAb)是免疫性不孕最常見的一種因素。抗精子抗體(AsAb)是一個復雜的病理產物，其作用主要表現為精子凝集、精子制動，影響精子的運送，抑制精子穿透宮頸黏液，限制精子與卵透明帶粘附，抑制精子頂體的活性，使精子不易穿透包繞卵細胞的放射冠和透明帶，阻礙精子與卵細胞膜的融合，阻止精子與卵子結合等。

抗繆勒管激素是一種不同于睪酮的蛋白質類物質，產生于包括人類在內的所有哺乳類動物的睪丸，它能夠導致繆勒管退化。抗繆勒管激素屬于轉化生長因子β超家族的一種多肽，是由兩個相同的70kb亞基組成的二聚糖蛋白，相對分子質量為140 000。其在雄性體內的唯一作用就是導致胎兒體內的繆勒管退化，使其具有男性表型。當缺乏抗繆勒管激素時，繆勒管可發展成為子宮、輸卵管和陰道上部。

微流控(Microfluidics)指的是使用微管道(尺寸為數十到數百微米)處理或操縱微小流體(體積為納升到阿升)的一種技術。當微通道的特征尺寸在微米甚至納米量級時，微通道表面積與其內部空間的體積之比很大，通道的結構、形狀和壁面性質都將對其中的流體流動狀態產生極大的影響。流體在微流控的微通道中具有獨特的流體性質，如層流和液滴等。借助這些獨特的流體現象，微流控可以實現一系列常規方法所難以完成的微加工和微操作。

免疫熒光技術(Immunofluorescence technique)是免疫學方法(抗原抗體特異結合)與熒光標記技術結合，使用熒光微球標記已知的抗原或抗體，再用這種熒光抗體(或抗原)作為分子探針檢查細胞或組織內的相應抗原(或抗體)。在檢測過程中，采用熒光微球最佳激發光源進行激發，發射出的熒光經過濾光片后，用CCD掃描技術或光纖技術，將發射光譜收集、聚集和倍增后，轉換成數值信號，實時檢測熒光變化曲線。

目前市面上尚無抗精子抗體和抗繆勒管激素聯合定量檢測產品，單獨的抗精子抗體檢測產品多采用酶聯免疫吸附法和淺盤凝集法，單獨的抗繆勒管激素檢測產品多采用雙抗夾心ELISA方法，這些方法尚存在以下方面的不足：

酶聯免疫吸附法是采用正常精子膜抗原包被反應板，加待測標本及酶標記二抗底物顯色，陽性為明顯黃色，陰性孔不顯色。此方法無法定量檢測抗精子抗體的含量，且操作復雜，且影響因素較多，檢測結果易受外界因素的干擾。

淺盤凝集法是將微量正常精子與待測標本在淺盤中混合，鏡下觀察有無凝集。有活動的凝集精子為陽性。此方法無法定量檢測抗精子抗體的含量，且靈敏度低，且較易受到外界因素的干擾。

雙抗夾心ELISA法只能定性或者半定量檢測血液樣本中抗繆勒管激素的含量，而無法精確定量檢測。

發明內容

針對以上現有技術問題，本實用新型的目的在于提供一種聯合定量檢測卡。采用微流控技術和免疫熒光技術制成包括覆有濾紙的加樣區、噴涂有不同熒光微球標記的抗精子二抗和抗繆勒管激素抗體的結合區、并聯微通道時間閥、包被有抗精子二抗并具有特殊結構的檢測區、包被有抗繆勒管激素抗體并具有特殊結構的檢測區和廢液區的抗精子抗體和抗繆勒管激素聯合定量檢測卡。具體技術方案如下：

一種聯合定量檢測卡，包括底卡和面卡，其中，所述底卡上設有加樣區，結合區，閥，檢測區以及廢液區，所述加樣區連接結合區且加樣區與結合區位于閥的一端，所述檢測區連接廢液區且位于閥的另一端；所述面卡上設有加樣孔和檢測孔，所述底卡和面卡的背面扣合連接。

進一步地，所述加樣區覆有濾紙。

進一步地，所述檢測區包括第一檢測區和第二檢測區共兩個檢測區。

進一步地，所述閥為并聯微通道時間閥。

進一步地，所述結合區和檢測區分別設置于并聯微通道時間閥的兩端并直接連接至并聯微通道時間閥。

進一步地，所述微通道時間閥為通過軟光刻技術制成的微通道。

進一步地，兩條并聯微通道時間閥寬度均為3μm。

進一步地，所述濾紙直徑1.5cm、孔徑為1～3μm。

進一步地，所述檢測區帶有彎型通道。

上述抗精子抗體和抗繆勒管激素聯合定量檢測卡的制作方法，包括如下步驟：

(1)制作底卡模板；

(2)制備不同熒光微球標記的抗精子二抗和抗繆勒管激素抗體混合液；

(3)噴涂抗體混合液；

(4)包被抗體；

(5)濾紙粘覆；