[發明專利]一種高脂松樹莖段組培芽誘導和增殖培養的方法

有效

• 申請號: 201310593867.8
• 申請日: 2013-11-22
• 公開（公告）號: CN103548699A
• 公開（公告）日: 2014-02-05
• 發明（設計）人: 蔡玲;姚瑞玲;劉海龍;吳幼媚
• 申請（專利權）人: 廣西壯族自治區林業科學研究院
• 主分類號: A01H4/00
• 分類號: A01H4/00
• 代理公司: 廣西南寧匯博專利代理有限公司 45114
• 代理人: 鄒超賢

技術領域

本發明屬植物繁殖技術領域，涉及松樹組織培養技術，尤其是一種高脂松樹莖段組培芽誘導和增殖培養的方法。

背景技術

高脂松樹是新松木品種，是集采脂、紙漿、纖維板，膠合板、建筑材、家具材為一身的優良樹種，具有速生、樹干通直，高產脂，抗逆性及適應性強等優良性狀，適合亞熱帶地區種植。高脂松樹一般5-8年左右可以成材，綜合利用價值高。由于高脂松樹種子量少，同時種子苗有分化，良種資源極少。無性繁殖高脂松樹，可以保持母本的優良性狀。目前，高脂松樹主要是扦插和嫁接。高脂松樹的扦插和嫁接，由于受良種穗條有限，制約優良品種的快速推廣。作為苗木的組培快繁技術，雖然在組織培養過程有所研究，仍存在著許多問題。例如繼代芽松脂含量高造成芽褐死、易玻璃化，增殖系數低，有效芽數少，繼代周期長，多次繼代芽活性降低，增殖系數降低。因此，在高脂松組培繼代芽培養中，上述問題更為突出,特別需要一種高脂松組培繼代芽的培養方法，解決現有存在的技術問題，適應大力發展高脂松樹人工林的需要。

發明內容

本發明的目的是針對現有高脂松樹組織培養初代芽褐化嚴重至死，芽增殖系數低,高生長緩慢等問題,提供一種高脂松樹莖段組培芽誘導和增殖培養的方法。

本發明所解決的技術問題采用以下技術方案來實現：

一種高脂松樹莖段組培芽誘導和增殖培養的方法，采用組培莖段選擇與處理、組培芽誘導、繼代增殖擴繁、叢生芽伸長和壯芽培養等組培技術體系，獲得優質高脂松樹芽，其操作步驟如下：

（1）組培莖段選擇與處理??

高脂松樹的組培莖段芽選自年產松脂達4-4.5kg/a.株的高脂松樹穗條嫁接成活的植株，剪取春季萌發的半木質化嫩枝稍，長6-10cm,用苯扎溴銨按常規方法清洗，然后用自來水沖洗十浸泡15min，洗去嫩枝稍上的塵埃和苯扎溴銨，再將嫩枝稍裁成1-2cm長的莖段，視木質化程度分類置放容器內，用0.1%的新吉爾滅浸泡10-15?min，在無菌條件下，用0.15%HgCl₂滅菌消毒3-5min，再用無菌水沖洗3-4次，最后用0.1%HgCl₂滅菌消毒4-6min，無菌水沖洗4-5次后，將滅菌消毒的莖段放在無菌濾紙上將水吸干；

（2）組培芽誘導

將無菌莖段放入誘導培養基中進行組培芽誘導，組培芽誘導的方法是：先放置溫度7-10℃的環境,暗培養5-7d，再轉入溫度20-25℃,光照強度1200-2000lux,光照12-14h/d條件下培養50-60d，形成初代芽；

（3）芽繼代增殖擴繁

將初代芽接入增殖擴繁培養基中進行繼代增殖擴繁，繼代增殖擴繁控制溫度17-20℃，光照強度2000-4000lux，光照10-14h/d，培養5-7d，再在溫度20-25℃，光照強度2000-4000lux，光照10-14h/d的條件下培養15-20d，經2-3次繼代增殖擴繁周期形成叢生芽,平均增殖系數6.95以上；

（4）叢生芽伸長

將＜1cm芽叢接入伸長培養基中進行叢生芽伸長，叢生芽伸長控制溫度17-20℃，光照強度2000-4000lux，光照10-14h/d，培養5-7天，再在溫度22-25℃，光照強度2000-4000lux，光照10-14h/d的條件下培養20-25d，得到長2-3cm的伸長叢生芽；

（5）壯芽培養

將高≥2cm的單芽切下，插入壯芽培養基中，溫度20-25℃，光照強度2000-4000lux，光照10-14h/d，培養壯芽；將＜1cm芽叢接入增殖擴繁培養基中，進行叢生芽繼代增殖培養。

以上所述的誘導培養基配方為:1/2改良DCR十6-BA3-5mg/L十NAA0.5-1.0mg/L十VC15?mg/L?十椰子汁40-60ml/L十瓊脂粉3.8g/L十蔗糖20g/L。

以上所述的增殖擴繁培養基配方為:1/2改良DCR十6-BA0.5-3mg/L十NAA0.05-0.5mg/L十VC15mg/L十椰子汁10-30ml/L十瓊脂粉3.8g/L十蔗糖20g/L。

以上所述的伸長培養基配方為：改良DCR十6-BA0.1-0.3mg/L十NAA0.05-0.2mg/L十椰子汁10-20ml/L十活性碳3g/L十瓊脂粉4.0g/L十蔗糖20g/L。

以上所述的壯芽培養基配方為：改良DCR十瓊脂粉4.0g/L十蔗糖20g/L。