[發明專利]一種識別CD19陽性腫瘤的嵌合抗原受體及細胞

在審

• 申請號: 201611271051.3
• 申請日: 2016-12-30
• 公開（公告）號: CN108264567A
• 公開（公告）日: 2018-07-10
• 發明（設計）人: 王磊;高斌;吳亞松;司遠;呂丹;魏卿
• 申請（專利權）人: 天津天銳生物科技有限公司
• 主分類號: C07K19/00
• 分類號: C07K19/00;C12N15/62;C12N5/10;A61K35/17;A61P35/00
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本發明公開了一種多靶點嵌合抗原受體，由主肽鏈和輔肽鏈組成，本發明的嵌合抗原受體可通過其CD19抗體的scFv結構域與靶細胞的CD19抗原結合，介導特異性的細胞殺傷；本發明的嵌合抗原受體可通過其IL?15與IL?15Rα?sushi的復合體刺激T/NK細胞，使其免除對IL?2的依賴并活化。本發明的嵌合抗原受體提供的胞外PD?1結構域可以作為靶細胞表達的PD?L1的特異性配體，一方面與T/NK細胞本身的PD?1競爭性結合靶細胞表面的PD?L1，另一方面此嵌合抗原受體的PD?1與PD?L1結合后信號傳導給胞內的4?1BBζ鏈，造成的結果不是T/NK細胞的抑制反而是激活，比單純用PD?1/PD?L1抗體封閉抗原的方法更勝一籌。

技術領域

本發明涉及生物技術領域，尤其是一種識別CD19陽性腫瘤的嵌合抗原受體及細胞。

背景技術

嵌合抗原受體(chimeric antigen receptor，CAR)是一種工程化的細胞表面受體，一般主要由抗原結合域、跨膜結構域和胞內信號傳導結構域三部分組成，抗原結合域可結合靶細胞表面的抗原，經由跨膜結構域激活胞內信號傳導結構域(專利號：CN 105392888A)。表達嵌合抗原受體的免疫細胞(例如T細胞或NK細胞)在胞內信號傳導結構域的刺激下釋放細胞因子誘導靶細胞凋亡，達到殺傷特定靶細胞的目的。

B細胞惡性腫瘤是一種很常見的癌癥，包括多種白血病和B細胞淋巴瘤。CD19是一個特異性表達在B細胞表面的蛋白，其他類型細胞都沒有或很低水平表達，因此CD19成為一個非常理想的B細胞淋巴瘤標志抗原。研究者用CD19抗體作為抗原結合域構建CD19-CAR(CD19嵌合抗原受體)并將其表達在T細胞表面，借助CD19抗體的特異識別能力和T細胞的細胞殺傷能力，得到了特異殺傷B細胞淋巴瘤的CD19-CAR-T細胞。全球現在進行著大量的CD19-CAR-T的技術開發和臨床研究，CD19-CAR-T在黑色素瘤、骨髓瘤和急/慢性淋巴細胞白血病等幾乎所有實驗都顯示了極高的有效性(專利申請號：201480027401.4，201480027071.9，201510532222.2，201510061635.7)。

PD-1(programmed death 1)和它的受體PD-L1，PD-L2是T細胞活性的重要調節因子。T細胞表面的PD-1與其他細胞表面的PD-L1/2的結合造成T細胞的抑制，這在人體避免自體免疫病和產生免疫耐受的過程中起到重要作用，但一些病原微生物和癌細胞也能通過上調自身PD-L1/2或T細胞PD-1表達來逃避T細胞的監視，進而造成疾病。因此研究者探索用PD-1或PD-L1的抗體去結合抗原，以封閉這一信號通路，結果顯示此方法能夠顯著提高T細胞活性，增強機體對病原微生物和癌癥的抵抗能力，已有多項臨床試驗證明了PD-1/PD-L1抗體對于黑色素瘤、多發性骨髓瘤、白血病等癌癥都有很好的治療效果(專利申請號：200380109929.8，201310258289.2，201180019629.5)。

T細胞或NK細胞的體外擴增都依賴IL-2的刺激，因此T細胞和NK細胞的培養基中都必須添加一定量的IL-2.為了簡化NK細胞培養，并且鑒于IL-2在臨床應用上的毒副作用，研究者對IL-2依賴的NK-92細胞做基因改造，使之穩定表達IL-2，發現可以免除培養基中IL-2的添加。IL-15與IL-2功能類似，而且共用相同的βγ受體，研究表示IL-2或IL-15對于NK細胞和CD8+T細胞的存活和增殖是必須的。于是研究者構建表達IL-15的NK細胞系，發現表達IL-15的NK-92細胞可以很大程度的減少培養基中IL-2的添加(專利號：03152968.2)。IL-15與IL-2雖然共用相同的βγ受體，但各自又有特異的α受體，研究發現IL-15Rα-sushi(IL-15受體α的sushi結構域)是IL-15的超級激動劑，可以極大的提高IL-15的功能(專利申請號：201280037114.2，201510358540.1)，IL-15與IL-15Rα-sushi的復合體可以完全替代IL-2在T/NK細胞中的作用，激活NK/CD8+T細胞并提高其殺傷腫瘤的細胞毒性。

發明內容