[發明專利]一種肝素修飾的陽離子脂質體及其制備方法

在審

• 申請號: 201611270715.4
• 申請日: 2016-12-27
• 公開（公告）號: CN106729747A
• 公開（公告）日: 2017-05-31
• 發明（設計）人: 柯學;李昊歡;陳藝
• 申請（專利權）人: 中國藥科大學
• 主分類號: A61K47/69
• 分類號: A61K47/69;A61K47/61;A61K31/12;A61K9/19;A61P35/00
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技術領域

本發明涉及藥物制劑領域，具體涉及一種肝素修飾的陽離子脂質體，本發明還公開了這種肝素修飾的陽離子脂質體的制備方法。

背景技術

陽離子脂質體具有無免疫原性、可生物降解、可重復轉染等特性，一直受到相關研究者的重視，至今已有數十種陽離子脂質體被研制出來。但研究表明，單獨使用陽離子脂質體具有一定的風險。實驗動物靜脈注射給予陽離子脂質體后，傾向于與血漿蛋白或血細胞聚合，并通過靜電作用附著于血管內皮細胞上，因此導致其從血液中快速消除或定位于肺部，增加肺栓塞的危險。陽離子脂質體的另一個毒性表現為免疫反應，Zelphati等的試驗結果顯示陽離子脂質可以激活血清中的補體系統，補體系統激活后可以促進補體成分與脂質體的結合，因而會被肺部或肝臟補體成分受體所識別，導致陽離子脂質體快速地從血流中清除而被肺或肝臟所攝取。采用親水性的材料結合陽離子脂質體，對陽離子脂質體實施保護，可以大大降低陽離子脂質體引起的體內安全性風險。

肝素是一種酸性的粘多糖，極易溶于水。肝素作為理想的陽離子脂質體修飾材料的優勢主要集中體現在兩個方面：首先，肝素可以代替PEG作為藥物載體的親水性修飾材料，用于構建膠束、脂質體等。親水性材料PEG常用于載體修飾，以達到長循環的目的。但是，PEG修飾的載體在體內中也存有諸多弊端和一些不能忽視的問題，如靜脈重復注射PEG化脂質體可加速血液清除，從而大大限制了其臨床應用。肝素作為修飾材料，具有類PEG化的作用，修飾后的載體表現出更為出色的穩定性、安全性。其次，有研究表明肝素或肝素類似物可以通過成纖維細胞生長因子受體內吞進入腫瘤和腫瘤內皮細胞。因此，肝素修飾的陽離子載藥脂質體可賦予藥物載體一定的腫瘤血管內皮細胞和腫瘤細胞靶向性，提高治療效果。

本發明是在構建陽離子脂質體的基礎上，通過共價鍵連接的方式結合肝素，得到肝素修飾的陽離子脂質體。本發明的肝素修飾的陽離子脂質體，體外穩定性實驗證明，肝素修飾的陽離子脂質體能顯著提高陽離子脂質體的穩定性。載體溶血性實驗證明，修飾肝素后，陽離子脂質體的安全性得到提高。

發明內容

本發明的肝素修飾的陽離子脂質體，含下列組分及重量比：

本發明的肝素修飾的陽離子脂質體的制備方法包括：將蛋黃卵磷脂、膽固醇、陽離子材料、藥物溶于有機溶劑，減壓蒸發去除有機溶劑；活化劑活化肝素，備用；將活化后的肝素溶液加入制備的陽離子脂質體中室溫反應過夜；超濾除去游離的肝素，即得肝素修飾的陽離子脂質體混懸液；制備成凍干粉針劑時，將凍干保護劑溶解于脂質體混懸液中，冷凍干燥即可。

上述陽離子材料選自氯化三甲基-2，3-二油烯氧基丙基銨、溴化三甲基-2，3-二油酰氧基丙基銨、三氟乙酸二甲基-2，3-二油烯氧基丙基-2-(2-精胺甲酰氨基)乙基銨、溴化三甲基十二烷基銨、溴化三甲基十四烷基銨、溴化三甲基十六烷基銨、溴化二甲基雙十八烷基銨、N-(2-精胺甲酰基)-N’，N’-雙十八烷基甘氨酰胺、1，2-二油酰-3-琥珀酰-sn-甘油膽堿酯、3β-[N-(N’，N’-二甲基胺乙基)胺基甲酰基]膽固醇、脂質多聚-L-賴氨酸、硬脂胺中的一種或幾種。

上述凍干保護劑選自蔗糖、乳糖、葡萄糖、甘露醇中的一種或幾種。

上述藥物可以是姜黃素及其衍生物的一種或幾種的混合物。

上述有機溶劑選自氯仿、二氯甲烷、乙醚、乙醇、丙酮中的一種或幾種，優選二氯甲烷、氯仿。

上述活化劑選自1-乙基-(3-二甲基氨基丙基)碳酰二亞胺鹽酸鹽與N-羥基硫代琥珀酰亞胺的混合物，兩者比例為1∶2-1∶6。

上述肝素選自普通肝素、達肝素鈉、依諾肝素、納肝素鈣、帕肝素鈉、汀肝素鈉中的一種或幾種。

本發明所涉及的比例均為重量比。

當膽固醇取一個固定值，蛋黃卵磷脂取不同的重量時，肝素修飾的陽離子脂質體混懸液的平均粒徑和包封率也不同。結果見表1。

表1：藥物和蛋黃卵磷脂的比例對脂質體粒徑和包封率的影響(n＝3)

從表中可以看出，當藥物和蛋黃卵磷脂重量比小于1∶5時，粒徑較大，包封率很低；當藥物：磷脂重量比大于1∶35時，脂質體溶液的透光性下降，粒徑逐漸增大，放置越久越不穩定；當藥物和大豆卵磷脂重量比在1∶5～35范圍內，包封率較高，粒徑符合要求，因此本發明中藥物/蛋黃卵磷脂的比例為1∶5～35。

當蛋黃卵磷脂取一個固定值，膽固醇取不同的重量時，肝素修飾的陽離子脂質體混懸液的平均粒徑和包封率也不同。結果見表2。