[發(fā)明專利]一種騷動(dòng)厄斯考維菌及在制備(R)-3-氯苯乙醇中的應(yīng)用

有效

• 申請?zhí)枺?/td>: 201611266505.8
• 申請日: 2016-12-31
• 公開（公告）號: CN106811432B
• 公開（公告）日: 2020-04-28
• 發(fā)明（設(shè)計(jì)）人: 何軍邀;王普;白東亞
• 申請（專利權(quán)）人: 浙江醫(yī)藥高等專科學(xué)校;浙江工業(yè)大學(xué)
• 主分類號: C12N1/20
• 分類號: C12N1/20;C12P7/22;C12R1/01
• 代理公司: 杭州天正專利事務(wù)所有限公司 33201
• 代理人: 黃美娟;李世玉

本發(fā)明公開了一種騷動(dòng)厄斯考維菌及在制備(R)?3?氯苯乙醇中的應(yīng)用，采用該新菌種催化制備光學(xué)純(R)?3?氯苯乙醇具有底物濃度高，立體選擇性好，產(chǎn)物光學(xué)純度高等優(yōu)點(diǎn)。本發(fā)明通過采用騷動(dòng)厄斯考維菌(Oerskovia turbata)ZJPH1604細(xì)胞為催化劑的手性生物催化，當(dāng)?shù)孜餄舛葹?0mmol/L時(shí)，目的產(chǎn)物(R)?3?氯苯乙醇的e.e達(dá)到99.9％，產(chǎn)率達(dá)到98.1％。

(一)技術(shù)領(lǐng)域

本發(fā)明涉及一株可用于生物催化不對稱還原3-氯苯乙酮制備高光學(xué)純度(R)-3-氯苯乙醇的新菌種——騷動(dòng)厄斯考維菌(Oerskovia turbata)ZJPH1604及其應(yīng)用。

(二)背景技術(shù)

(R)-3-氯苯乙醇的化學(xué)結(jié)構(gòu)式為：

(R)-3-氯苯乙醇是一種重要的手性中間體，是多種藥物分子的構(gòu)建模塊，例如，它可以用于合成治療脊髓型肌肉萎縮癥的活性化合物(R)-5-[1-(3-氯苯基)乙氧基]喹唑啉-2,4-二胺，還可以用于合成治療抑郁癥、糖尿病和肥胖的β₃-腎上腺素受體激動(dòng)劑，包括SR58611，Solabegron，CL316243，AJ-9677等。

采用化學(xué)法制備(R)-3-氯苯乙醇，需要使用價(jià)格昂貴的如銠、釕等金屬催化劑，會(huì)對環(huán)境造成污染。采用微生物全細(xì)胞催化的生物不對稱還原方法制備(R)-3-氯苯乙醇具有反應(yīng)條件溫和、立體選擇性高、環(huán)境友好等優(yōu)點(diǎn)。

已有文獻(xiàn)報(bào)道，John Thurmond等(J.Med.Chem.2008,51,449–469)利用手性催化劑((S)-MeCBS和(R)-MeCBS)催化還原3-氯苯乙酮制備(R)-3-氯苯乙醇，Perna等(J.ofMol.Catal.B:Enzym.,2016,124:29–37)利用Lactobacillus reuteri靜息細(xì)胞催化還原3-氯苯乙酮制備(R)-3-氯苯乙醇，轉(zhuǎn)化率100％，對映體過量值(ee)99％，當(dāng)?shù)孜餄舛?g/L時(shí)，轉(zhuǎn)化率低于70％。

(三)發(fā)明內(nèi)容

本發(fā)明目的是提供一株可用于生物催化不對稱還原3-氯苯乙酮制備高光學(xué)純度(R)-3-氯苯乙醇的微生物新菌種——騷動(dòng)厄斯考維菌(Oerskovia turbata)ZJPH1604，以及該菌種在催化不對稱合成制備(R)-3-氯苯乙醇中的應(yīng)用。

本發(fā)明采用的技術(shù)方案是：

本發(fā)明提供一株新菌株--騷動(dòng)厄斯考維菌(Oerskovia turbata)ZJPH1604，保藏于中國典型培養(yǎng)物保藏中心，保藏編號：CCTCC NO：M 2016541，保藏日期：2016年9月30日，地址：中國，武漢，武漢大學(xué)，郵編：430072。

本發(fā)明還提供一種所述騷動(dòng)厄斯考維菌ZJPH1604在微生物催化不對稱還原3-氯苯乙酮制備(R)-3-氯苯乙醇中的應(yīng)用，具體所述應(yīng)用為：以3-氯苯乙酮為底物，以騷動(dòng)厄斯考維菌ZJPH1604經(jīng)發(fā)酵培養(yǎng)獲得的濕菌體細(xì)胞為酶源，加入輔助底物，于pH為6.0～9.0的緩沖液中，在25～35℃下進(jìn)行轉(zhuǎn)化反應(yīng)，反應(yīng)結(jié)束后，反應(yīng)液經(jīng)分離純化得到(R)-3-氯苯乙醇；所述輔助底物為葡萄糖、蔗糖、麥芽糖、異丙醇、甲醇或乙醇中的一種。

進(jìn)一步，所述底物3-氯苯乙酮的初始濃度為20～200mmol/L緩沖液(優(yōu)選25-150mmol/L)，騷動(dòng)厄斯考維菌ZJPH1604濕菌體細(xì)胞的添加量以濕重計(jì)為50～300g/L緩沖液(優(yōu)選100-300g/L)；所述輔助底物為葡萄糖、蔗糖或麥芽糖時(shí)，加入量為20～300g/L緩沖液(優(yōu)選100-300g/L)，所述輔助底物為甲醇、乙醇或異丙醇時(shí)，加入體積為緩沖液體積的10～30％(優(yōu)選20％)。