[發(fā)明專利]一種miR-214納米基因復(fù)合物及其制備方法、應(yīng)用

有效

• 申請(qǐng)?zhí)枺?/td>: 201611266357.X
• 申請(qǐng)日: 2016-12-31
• 公開（公告）號(hào): CN106729755B
• 公開（公告）日: 2020-08-04
• 發(fā)明（設(shè)計(jì)）人: 徐瑞華;駱卉妍;楊哲;劉杰
• 申請(qǐng)（專利權(quán)）人: 中山大學(xué)腫瘤防治中心
• 主分類號(hào): A61K48/00
• 分類號(hào): A61K48/00;A61K9/51;A61K31/7105;A61K47/34;A61K47/42;A61P35/00
• 代理公司: 廣州德科知識(shí)產(chǎn)權(quán)代理有限公司 44381
• 代理人: 萬振雄

本發(fā)明涉及基因治療技術(shù)領(lǐng)域，公開一種miR?214納米基因復(fù)合物及其制備方法、應(yīng)用。該miR?214納米基因復(fù)合物為聚乙烯咪唑?(聚天冬氨酸?胱胺?R₈多肽)?膽固醇?DNA納米基因復(fù)合物，可用于制備預(yù)防癌癥和/或治療癌癥的藥物。該miR?214納米基因復(fù)合物能夠通過上調(diào)miR?214的表達(dá)來抑制細(xì)胞的增殖，轉(zhuǎn)移，侵襲以及體內(nèi)腫瘤的生長(zhǎng)和向肝臟的轉(zhuǎn)移，可有效減少結(jié)直腸癌的肝轉(zhuǎn)移的發(fā)生。此外，本發(fā)明還提供一種聚乙烯咪唑?(聚天冬氨酸?胱胺?R₈多肽)?膽固醇聚合物，其作為納米基因載體具有強(qiáng)跨膜轉(zhuǎn)運(yùn)能力、核靶向能力，具有高的基因轉(zhuǎn)染效率。

技術(shù)領(lǐng)域

本發(fā)明涉及基因治療技術(shù)領(lǐng)域，具體是一種miR-214納米基因復(fù)合物及其制備方法、應(yīng)用。

背景技術(shù)

結(jié)直腸癌是人類最常見的惡性腫瘤之一，且發(fā)病率逐年上升。超過60％的結(jié)直腸癌患者都會(huì)出現(xiàn)肝轉(zhuǎn)移，其中約10％～25％的患者首診時(shí)就已經(jīng)存在肝轉(zhuǎn)移(同時(shí)性肝轉(zhuǎn)移)，可見肝轉(zhuǎn)移是結(jié)直腸癌主要的死亡原因之一。為了能夠有效治療結(jié)直腸癌、降低肝轉(zhuǎn)移發(fā)生的機(jī)率，基因治療已經(jīng)成為越來越受到重視的治療方法。

miRNA是小分子非編碼RNA家族的重要成員，許多研究表明，miRNA表達(dá)譜在惡性腫瘤中會(huì)發(fā)生改變。如果能夠通過基因治療的方法，改變腫瘤中miR-214的基因的表達(dá)，這將為結(jié)直腸癌的治療提供新的思路。

發(fā)明內(nèi)容

本發(fā)明公開一種miR-214納米基因復(fù)合物及其制備方法和應(yīng)用，以通過基因治療降低結(jié)直腸癌肝轉(zhuǎn)移的發(fā)生。

第一方面，本發(fā)明公開一種miR-214納米基因復(fù)合物，所述miR-214納米基因復(fù)合物是聚乙烯咪唑-(聚天冬氨酸-胱胺-R8多肽)-膽固醇-DNA納米基因聚合物，其中DNA是嵌有miR-214的DNA。

在本發(fā)明中，miR-214是miRNA-214，嵌有miR-214的DNA可通過商業(yè)購買得到，也可通過本領(lǐng)域常規(guī)技術(shù)手段制得，例如通過基因修飾技術(shù)將miR-214嵌入到DNA中。嵌有miR-214的DNA材料屬于現(xiàn)有技術(shù)，在本發(fā)明中不作進(jìn)一步描述。

進(jìn)一步地，所述miR-214納米基因復(fù)合物是通過將聚乙烯咪唑-(聚天冬氨酸-胱胺-R8多肽)-膽固醇聚合物與嵌有miR-214的DNA進(jìn)行孵育得到的。

進(jìn)一步地，所述聚乙烯咪唑-(聚天冬氨酸-胱胺-R8多肽)-膽固醇聚合物是以聚乙烯咪唑?yàn)榇蠓肿右l(fā)劑，通過開環(huán)聚合反應(yīng)合成聚天冬氨酸主體化合物，通過化學(xué)連接將膽固醇分子引入所述主體化合物末端，再通過氨解反應(yīng)及化學(xué)鏈接將胱胺和R8多肽引入所述主體化合物主體的側(cè)鏈形成的。

其中，R₈多肽是指具有八個(gè)精氨酸的多肽結(jié)構(gòu)，可以通過商業(yè)購買獲得，例如R₈多肽可購自于上海吉爾生化有限公司。

第二方面，本發(fā)明公開一種上述miR-214納米基因復(fù)合物的制備方法，包括以下步驟：

制備聚乙烯咪唑-(聚天冬氨酸-胱胺-R₈多肽)-膽固醇聚合物溶液；

將所述聚乙烯咪唑-(聚天冬氨酸-胱胺-R₈多肽)-膽固醇聚合物溶液與嵌有miR-214的DNA溶液進(jìn)行孵育，通過靜電作用力形成所述納米基因復(fù)合物。