[發(fā)明專利]量子點(diǎn)檢測(cè)體液中尿酸的方法

有效

• 申請(qǐng)?zhí)枺?/td>: 201611265817.7
• 申請(qǐng)日: 2016-12-30
• 公開(kāi)（公告）號(hào): CN106872422B
• 公開(kāi)（公告）日: 2018-04-03
• 發(fā)明（設(shè)計(jì)）人: 王冠男;梅晰凡;金麗;陳書睿;高巍
• 申請(qǐng)（專利權(quán)）人: 錦州醫(yī)科大學(xué)
• 主分類號(hào): G01N21/64
• 分類號(hào): G01N21/64
• 代理公司: 北京太兆天元知識(shí)產(chǎn)權(quán)代理有限責(zé)任公司11108
• 代理人: 張洪年

技術(shù)領(lǐng)域

本發(fā)明涉及一種檢測(cè)體液中尿酸的方法，具體涉及采用量子點(diǎn)檢測(cè)體液中尿酸的方法。

背景技術(shù)

量子點(diǎn)又稱為熒光半導(dǎo)體納米顆粒，量子點(diǎn)受激發(fā)光照射后可以發(fā)射熒光，且可以與生物大分子結(jié)合，具有極強(qiáng)的生物相容性。與傳統(tǒng)的熒光染料相比，量子點(diǎn)有可調(diào)諧的發(fā)射波長(zhǎng)，可以通過(guò)調(diào)整其粒徑來(lái)獲得具備不同發(fā)射光譜的量子點(diǎn)。同時(shí)，量子點(diǎn)具有較大的斯托克斯位移和對(duì)稱型的熒光光譜，可以有效減弱激發(fā)光對(duì)發(fā)射光的影響，進(jìn)而降低系統(tǒng)復(fù)雜度。

近年來(lái)，隨著生活水平的提高，高尿酸血癥和痛風(fēng)的發(fā)病率逐年上升，發(fā)病年齡提前。心腦血管病并發(fā)高尿酸血癥的患者易誘發(fā)急性心肌梗死、卒中，導(dǎo)致病死率增高。作為代謝綜合征的組分之一，高尿酸血癥與代謝綜合征的其他組分如：高血壓、糖代謝紊亂、脂代謝紊亂、肥胖、動(dòng)脈粥樣硬化等常并存而且相互影響。

目前，測(cè)定尿酸的方法主要有酶法和非酶法兩大類。與高效液相色譜法，毛細(xì)管電泳法等非酶法相比，基于尿酸氧化酶的酶法有高的特異性，但是由于其操作繁瑣，而且所用試劑昂貴，過(guò)程中要加入抗壞血酸氧化酶以減少抗壞血酸等還原性物質(zhì)的干擾。因此仍存在不少缺陷。

發(fā)明內(nèi)容

我們提供了一種量子點(diǎn)檢測(cè)體液中尿酸的方法，原理如下：

尿酸在尿酸酶催化下，氧化生成尿囊素和過(guò)氧化氫。在HRP的作用下，過(guò)氧化氫能夠使兒茶酚氧化，形成的氧化產(chǎn)物能夠使量子點(diǎn)的熒光高效猝滅。同時(shí)，我們采用乳化法將疏水化改性后的高分子材料直接包裹脂溶性量子點(diǎn)，獲得的量子點(diǎn)對(duì)該氧化產(chǎn)物更為敏感。并且傳感器的熒光猝滅程度與尿酸濃度在0.05-10μmol/L范圍內(nèi)成正比，且能夠檢測(cè)出0.01μmol/L尿酸。因此，提供了一種檢測(cè)體液中尿酸方法，該方法與現(xiàn)有技術(shù)相比，具有高度的靈敏度。

制備方法如下：

(1)制備CdSe/ZnS量子點(diǎn)；

(2)采用乳化法將疏水化改性后的高分子材料直接包裹該量子點(diǎn)，獲得水溶性量子點(diǎn)；

(3)分別將待測(cè)樣品和標(biāo)準(zhǔn)樣品與尿酸酶、HRP和兒茶酚反應(yīng)，加入水溶性量子點(diǎn)溶液后，測(cè)定其640nm的熒光發(fā)射峰強(qiáng)度后進(jìn)行比較，獲得待測(cè)樣品中的尿酸濃度。

進(jìn)一步的，提供一種量子點(diǎn)檢測(cè)體液中尿酸的方法，

(1)在劇烈攪拌下，將甲基鎘[(CH₃)₂Cd]和TOPSe(三辛基磷硒)迅速注射到300-400℃的三辛基氧膦(TOPO)中；然后迅速降溫至200-280℃，而后緩慢升溫到380-320℃；加入過(guò)量甲醇，通過(guò)離心分離得到CdSe納米顆粒；以硬脂酸鋅，六甲基二硅硫烷[(TMS)₂S]Zn作為前體，加入CdSe納米顆粒，在TOPO中合成CdSe/ZnS量子點(diǎn)；

(2)將聚(叔丁基丙烯酸酯-乙基丙烯酸酯-甲基丙烯酸)三嵌段共聚物與辛胺混合溶解在二甲亞砜中，加入碳化二亞胺反應(yīng)后純化，得到高分子溶液；將制備得到的CdSe/ZnS量子點(diǎn)和高分子溶液共同充分溶解在氯仿中，在超聲過(guò)程中加入到乳化劑Lipoid E-80和蒸餾水中，并繼續(xù)超聲，然后在室溫下對(duì)獲得的乳液進(jìn)行磁力攪拌，直到氯仿完全揮發(fā)，真空干燥，即得到水溶性量子點(diǎn)；

(3)稱取一定量的水溶性量子點(diǎn)粉末，使用磷酸緩沖溶液將其配制成量子點(diǎn)溶液備用；在磷酸緩沖液中加入一定量尿酸酶、HRP和兒茶酚，混合均勻后，用微量注射器逐步加入一定濃度的待測(cè)樣品(人體液)，在一定溫度下反應(yīng)，充分振搖后加入量子點(diǎn)溶液，測(cè)定其640nm的熒光發(fā)射峰強(qiáng)度；

(4)稱取一定量的水溶性量子點(diǎn)粉末，使用磷酸緩沖溶液將其配制成量子點(diǎn)溶液備用；在磷酸緩沖液中加入一定量尿酸酶、HRP和兒茶酚，混合均勻后，用微量注射器分別逐步加入不同濃度的尿酸溶液，在一定溫度下反應(yīng)，充分振搖后加入量子點(diǎn)溶液，測(cè)定其640nm的熒光發(fā)射峰強(qiáng)度，構(gòu)建線性關(guān)系；將步驟(3)獲得的待測(cè)樣品強(qiáng)度代入公式計(jì)算其尿酸濃度。

進(jìn)一步的，提供一種量子點(diǎn)檢測(cè)體液中尿酸的方法，