[發(fā)明專利]一種比伐盧定的制備方法

在審

• 申請(qǐng)?zhí)枺?/td>: 201611265509.4
• 申請(qǐng)日: 2016-12-30
• 公開（公告）號(hào): CN108383905A
• 公開（公告）日: 2018-08-10
• 發(fā)明（設(shè)計(jì)）人: 沈軍偉;章方良;王翔
• 申請(qǐng)（專利權(quán)）人: 江蘇金斯瑞生物科技有限公司
• 主分類號(hào): C07K14/815
• 分類號(hào): C07K14/815;C07K1/20;C07K1/06;C07K1/04
• 代理公司: 南京天華專利代理有限責(zé)任公司 32218
• 代理人: 夏平;李曉峰

1.一種比伐盧定的制備方法，其特征在于：包括以下步驟：

1)將氨基酸Fmoc-Leu-OH連接到固相樹脂上,得到Fmoc-Leu-固相樹脂；

2)脫除Fmoc-Leu-固相樹脂的保護(hù)基，以帶保護(hù)氨基酸為原料，依次偶聯(lián)得到比伐盧定樹脂肽；偶聯(lián)比伐盧定第5、6、7、8、10位的甘氨酸時(shí)，所采用的帶保護(hù)甘氨酸原料中包含至少一個(gè)Fmoc-Gly(DMB)-OH；

3)用酸性裂解試劑將比伐盧定從樹脂上裂解，經(jīng)沉淀后分離得到比伐盧定粗品；

4)粗品經(jīng)HPLC分離純化，得到目標(biāo)產(chǎn)物比伐盧定。

2.根據(jù)權(quán)利要求1所述的比伐盧定的制備方法，其特征在于：步驟1)中所述的固相樹脂為CTC樹脂或Wang樹脂。

3.根據(jù)權(quán)利要求1或2所述的比伐盧定的制備方法，其特征在于：步驟1)中所述Fmoc-Leu-固相樹脂的取代度為0.4-1.2mmol/g，優(yōu)選為0.5-0.9mmol/g。

4.根據(jù)權(quán)利要求1所述的比伐盧定的制備方法，其特征在于：步驟2)所述偶聯(lián)的過(guò)程中所采用的偶聯(lián)試劑選自DCC、EDC/HOBt、DIC/HOBt、HATU/HOAt/DIEA、TBTU/HOBt/NMM、HBTU/HOBt/DIEA、HCTU/HOBt/DIEA、BOP/HOAt/NMM、PyBOP/HOAt/DIEA中的任意一種。

5.根據(jù)權(quán)利要求1所述的比伐盧定的制備方法，其特征在于：步驟2)所述偶聯(lián)的反應(yīng)時(shí)間為0.5-2.0h，優(yōu)選0.5-1.5h。

6.根據(jù)權(quán)利要求1所述的比伐盧定的制備方法，其特征在于：步驟2)脫除Fmoc-Leu-固相樹脂保護(hù)基的過(guò)程中，所采用的脫Fmoc保護(hù)基的試劑為20％哌啶/DMF溶液，脫保護(hù)時(shí)間為15-60min，優(yōu)選20-40min。

7.根據(jù)權(quán)利要求1所述的比伐盧定的制備方法，其特征在于：步驟2)所述偶聯(lián)的過(guò)程中所使用的帶保護(hù)氨基酸投料量為所述Fmoc-Leu-固相樹脂取代度的1.0-3.0倍量，優(yōu)選1.0-2.5倍量。

8.根據(jù)權(quán)利要求1所述的比伐盧定的制備方法，其特征在于：步驟3)中所述的酸性裂解試劑為TFA與水的體積比為95:5的溶液、或者TFA與水與Tis的體積比為95:2.5:2.5的混合溶液、或者TFA與水與EDT與苯酚與茴香硫醚的比例為87.5:5:2.5:5:5的混合溶液；所述裂解的反應(yīng)時(shí)間為1.0-4.0h，優(yōu)選1.5-3.0h。

9.根據(jù)權(quán)利要求1所述的比伐盧定的制備方法，其特征在于：步驟4)HPLC分離純化過(guò)程中所用的色譜柱為C18的反相色譜柱，填料粒徑為10um；所用的洗脫液為乙腈/水或甲醇/水，洗脫液添加劑為三氟乙酸，三氟乙酸與乙腈/水或甲醇/水的體積比為0.01-0.15％，優(yōu)選0.05-0.1％。