[發明專利]用于孕婦血漿游離DNA非特異復制的試劑盒

有效

• 申請號: 201611264653.6
• 申請日: 2016-12-30
• 公開（公告）號: CN108265048B
• 公開（公告）日: 2021-07-09
• 發明（設計）人: 張介中;姜鋒;杜洋;玄兆伶;李大為;梁峻彬;陳重建
• 申請（專利權）人: 安諾優達基因科技（北京）有限公司;浙江安諾優達生物科技有限公司;安諾優達（義烏）醫學檢驗有限公司
• 主分類號: C12N15/10
• 分類號: C12N15/10
• 代理公司: 暫無信息
• 代理人: 暫無信息

本發明涉及一種用于孕婦血漿游離DNA非特異性復制的試劑盒。本發明的試劑盒包括用于加接頭的試劑、用于PCR擴增的試劑、用于切割的試劑。應用本發明的試劑盒進行孕婦血漿游離DNA復制具有以下優點：不引入外來序列，獲得大量與孕婦血漿游離DNA基本相同的可利用DNA片段。

技術領域

本發明屬于分子生物學領域，具體涉及一種用于孕婦血漿游離DNA非特異性復制的試劑盒。

背景技術

自然界中存在眾多不同種類的微量DNA片段，如體液游離DNA、孕婦血漿游離DNA等，而孕婦血漿游離DNA中胎兒游離DNA的發現無疑為無創傷性產前診斷開辟了新的途徑。因此，圍繞孕婦血漿游離DNA的研究越來越多，也發展出了許多潛在的臨床應用。比如，母體血漿中胎兒DNA的異常與許多妊娠相關的疾病有關，包括先兆子癇、早產、產前出血、侵入性胎盤形成、胎兒唐氏綜合癥和其他胎兒染色體非整倍性。由于母親血漿中胎兒游離DNA的含量只占總數的5％-30％，其含量極少，在提取過程中容易丟失，提取難度大，提取量較少，難以滿足常規檢測或研究的要求，如何獲得足量的微量DNA片段，是針對此類DNA進行研究及檢測急需解決的問題。

發明內容

鑒于上述現有技術中存在的問題，本發明的目的在于提供一種用于孕婦血漿游離DNA非特異復制的試劑盒，用于對孕婦血漿中的游離DNA片段進行有效復制，可獲得大量與其序列基本相同的DNA片段。

本發明為解決上述問題進行了深入研究，結果發現：使用具有脫氧尿嘧啶標記的引物對加接頭的DNA片段進行PCR擴增，使用具有脫氧尿嘧啶切割功能的酶及具有單鏈特異性切割功能的酶對PCR擴增產物進行酶切，可完全切除接頭序列，獲得大量與孕婦血漿中的游離DNA片段基本相同的DNA片段。

即，本發明包括：

1.一種用于孕婦血漿游離DNA非特異性復制的試劑盒，其中，包括：

用于加接頭的試劑，所述用于加接頭的試劑包括接頭；

用于PCR擴增的試劑，所述用于PCR擴增的試劑包括3'端有脫氧尿嘧啶標記的引物；

用于切割的試劑，所述用于切割的試劑包括具有脫氧尿嘧啶切割功能的酶和單鏈特異性切割功能的酶。

2.根據項1所述的試劑盒，其中，所述接頭為核苷酸序列如SEQ ID NO：1所示的單鏈DNA與核苷酸序列如SEQ ID NO：2所示的單鏈DNA的退火產物，

SEQ ID NO：1：5'-GCTCGTTAGATCGTCGTGTAGGCTACCAGTGT-3'，

SEQ ID NO：2：5'-CAGTGGACTTCAGACGTGTGATCTAACGAGCT-3'。

3.根據項1～2任一項所述的試劑盒，其中，所述3'端脫氧尿嘧啶標記的引物為核苷酸序列如SEQ ID NO：3所示的單鏈DNA與核苷酸序列如SEQ ID NO：4所示的單鏈DNA，

SEQ ID NO：3：5'-ACACTGGTAGCCTACACGACGATCTAACGAGCU-3'，

SEQ ID NO：4：5'-CAGTGGACTTCAGACGTGTGATCTAACGAGCU-3'。

4.根據項1～3任一項所述的試劑盒，其中，所述用于加接頭的試劑還包括選自下組中的至少一種：T4DNA連接酶和T4DNA連接酶緩沖液。

5.根據項1～4任一項所述的試劑盒，其中，所述具有脫氧尿嘧啶切割功能的酶為EndonucleaseⅧ和UDG混合物。

6.根據項1～5任一項所述的試劑盒，其中，所述具有單鏈特異性切割功能的酶為綠豆核酸酶和/或S1核酸酶。