[發明專利]一種從多種混合DNA中超靈敏檢測痕量DNA的方法和試劑有效
| 申請號： | 201611260467.5 | 申請日： | 2016-12-30 |
| 公開（公告）號： | CN106755443B | 公開（公告）日： | 2018-11-30 |
| 發明（設計）人： | 王永利;宋卓;袁夢兮 | 申請（專利權）人： | 人和未來生物科技（長沙）有限公司 |
| 主分類號： | C12Q1/6858 | 分類號： | C12Q1/6858 |
| 代理公司： | 深圳鼎合誠知識產權代理有限公司 44281 | 代理人： | 孫銀行;彭家恩 |
| 地址： | 410000 湖南省長沙市高新*** | 國省代碼： | 湖南;43 |
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| 摘要： | |||
| 搜索關鍵詞： | 探針 超靈敏檢測 待檢測區域 特異性富集 特異性引物 接頭連接 通用引物 痕量DNA 混合DNA 預富集 位點 雙鏈寡核苷酸 檢測靈敏度 通用引物對 復雜樣本 檢測技術 結合位點 目標DNA 外源DNA 檢測 擴增 上游 污染 | ||
1.一種從多種混合DNA中超靈敏檢測痕量DNA的方法，其特征在于，所述方法包括：
（a）使用探針對含有待檢測位點或待檢測區域的目標DNA的接頭連接產物進行探針預富集，其中所述探針是通過PCR擴增得到的一對或多對覆蓋待檢測位點或待檢測區域的雙鏈寡核苷酸，所述接頭連接產物的兩端的接頭均包括通用引物的結合位點；
（b）使用針對所述待檢測位點或待檢測區域的上游特異性引物和下游特異性引物，以及兩端的通用引物對探針預富集產物進行特異性富集，再對特異性富集產物進行通用引物擴增；以及
（c）對所述步驟（b）的擴增產物進行測序，以檢測所述待檢測位點或待檢測區域。
2.根據權利要求1所述的從多種混合DNA中超靈敏檢測痕量DNA的方法，其特征在于，所述探針帶有親和標記。
3.根據權利要求2所述的從多種混合DNA中超靈敏檢測痕量DNA的方法，其特征在于，所述親和標記是位于所述探針兩條鏈的5’端的生物素標記。
4.根據權利要求1所述的從多種混合DNA中超靈敏檢測痕量DNA的方法，其特征在于，所述步驟（b）使用多條所述上游特異性引物組成的引物組和多條所述下游特異性引物組成的引物組。
5.根據權利要求1所述的從多種混合DNA中超靈敏檢測痕量DNA的方法，其特征在于，所述探針長度為150-200bp。
6.根據權利要求1所述的從多種混合DNA中超靈敏檢測痕量DNA的方法，其特征在于，每一個所述上游特異性引物和下游特異性引物距離所述待檢測位點或待檢測區域的距離為1-20個堿基。
7.根據權利要求1所述的從多種混合DNA中超靈敏檢測痕量DNA的方法，其特征在于，每一個所述上游特異性引物和下游特異性引物距離所述待檢測位點或待檢測區域的距離為1-5個堿基。
8.根據權利要求1所述的從多種混合DNA中超靈敏檢測痕量DNA的方法，其特征在于，所述待檢測位點或待檢測區域包括點突變、插入、缺失和基因融合中的至少一種。
9.一種從多種混合DNA中超靈敏檢測痕量DNA的試劑，其特征在于，所述試劑包括：
（a）探針，所述探針是通過PCR擴增得到的一對或多對覆蓋待檢測位點或待檢測區域的雙鏈寡核苷酸，用于對含有待檢測位點或待檢測區域的目標DNA的接頭連接產物進行探針預富集，其中，所述接頭連接產物的兩端的接頭均包括通用引物的結合位點；
（b）上游特異性引物和下游特異性引物，以及通用引物，用于對探針預富集產物進行特異性富集，以及對特異性富集產物進行通用引物擴增。
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