[發(fā)明專利]銨鹽環(huán)境下利用斜生柵藻熒光檢測敵草凈生物毒性的方法

有效

• 申請?zhí)枺?/td>: 201611259674.9
• 申請日: 2016-12-30
• 公開（公告）號: CN106770121B
• 公開（公告）日: 2019-06-18
• 發(fā)明（設(shè)計）人: 崔建升;趙德華
• 申請（專利權(quán)）人: 河北科技大學
• 主分類號: G01N21/64
• 分類號: G01N21/64
• 代理公司: 石家莊元匯專利代理事務(wù)所(特殊普通合伙) 13115
• 代理人: 周大偉

銨鹽環(huán)境下利用斜生柵藻熒光檢測敵草凈生物毒性的方法，屬于斜生柵藻的技術(shù)領(lǐng)域，包括斜生柵藻藻種的培養(yǎng)、斜生柵藻藻液的制備，還包括銨鹽環(huán)境下敵草凈對斜生柵藻熒光效應(yīng)的影響測定：取系列濃度并填加有銨鹽溶液的敵草凈標準液加入到斜生柵藻藻液中，充分混合并搖勻，控制銨鹽溶液、敵草凈標準溶液和斜生柵藻藻液的體積比為2：(1?2)：(1?2)，同時設(shè)置蒸餾水代替敵草凈標準溶液的空白對照組，經(jīng)暗置10?15min后，用水樣熒光檢測儀測定斜生柵藻的各葉綠素熒光動力學參數(shù)。本發(fā)明方法簡單，易操作，可以直觀的反應(yīng)敵草凈的生物毒性。

技術(shù)領(lǐng)域

本發(fā)明屬于斜生柵藻的技術(shù)領(lǐng)域，涉及用指示藻測定敵草凈生物毒性，具體涉及銨鹽環(huán)境下利用斜生柵藻熒光檢測敵草凈生物毒性的方法。本發(fā)明方法快速靈敏。

背景技術(shù)

敵草凈英文名稱DesMetry，分子式C₈H₁₅N₅S，影響雜草光合作用，破壞細胞膜，除草效果為葉子的尖部、邊緣及葉脈間變黃變枯，最終達到除草目的。

敵草凈較好適用于棉花、大豆、麥類、花生、向日葵、馬鈴薯、果樹、蔬菜、茶樹及水稻田防除稗草、馬唐、千金子、野莧菜、蓼、藜、馬齒莧、看麥娘、繁縷、車前草等1年生禾本科及闊葉草。我國生產(chǎn)和使用敵草凈的歷史較短，但已有較大的污染事故發(fā)生，應(yīng)引起足夠的重視。敵草凈在土壤中不易降解，土壤中殘留的敵草凈還具有淋溶性，易被雨水、灌溉水淋溶至較深土層，或是隨地表徑流進入河流、湖泊，對地下水和地表水造成污染。

敵草凈造成的水污染情況日益嚴重，對敵草凈的檢測手段主要集中在HPLC高效液相色譜法和氣相色譜法，但這兩種方法只能測定敵草凈的含量，用濃度表示出來，不能直觀反應(yīng)其在生物體上的毒性表現(xiàn)。現(xiàn)在生物監(jiān)測方法越來越受到重視，因為其能直接反應(yīng)污染物對生物體生理特征的影響變化，直接反應(yīng)污染物的毒性。目前發(fā)光細菌法是比較成熟的生物毒性檢測方法，敵草凈對發(fā)光細菌的毒性作用通過發(fā)光細菌的發(fā)光強度的變化來反應(yīng)，從而確定敵草凈毒性，但是發(fā)光細菌法也存在發(fā)光細菌不穩(wěn)定和方法成本高等問題，因此開發(fā)一種穩(wěn)定的、低成本的測定敵草凈生物毒性的方法是迫切需要的。

發(fā)明內(nèi)容

本發(fā)明提供了一種銨鹽環(huán)境下利用斜生柵藻熒光檢測敵草凈生物毒性的方法，可以全面了解敵草凈的毒性效應(yīng)，而且能更深入的了解污染物的毒理作用機制與途徑，更能體現(xiàn)實際環(huán)境中敵草凈暴露的現(xiàn)象和信息，可利用葉綠素熒光分析技術(shù)檢測敵草凈的生物毒性。

本發(fā)明為實現(xiàn)其目的采用的技術(shù)方案是：

銨鹽環(huán)境下利用斜生柵藻熒光檢測敵草凈生物毒性的方法，包括斜生柵藻藻種的培養(yǎng)、斜生柵藻藻液的制備，還包括銨鹽環(huán)境下敵草凈對斜生柵藻熒光效應(yīng)的影響測定：取系列濃度并填加有銨鹽溶液的敵草凈標準液加入到斜生柵藻藻液中，充分混合并搖勻，控制銨鹽溶液、敵草凈標準溶液和斜生柵藻藻液的體積比為2：(1-2)：(1-2)，同時設(shè)置蒸餾水代替敵草凈標準溶液的空白對照組，經(jīng)暗置10-15min后，用水樣熒光檢測儀測定斜生柵藻的各葉綠素熒光動力學參數(shù)，測定敵草凈的生物毒性。

斜生柵藻藻種的培養(yǎng)包括，選取斜生柵藻藻種，于無菌條件下將藻種接種至裝有液體培養(yǎng)基的錐形瓶中，接種完成，置于恒溫光照培養(yǎng)箱中培養(yǎng)至對數(shù)期，備用。

斜生柵藻藻液的制備包括，將在斜生柵藻藻種的培養(yǎng)過程中得到的對數(shù)期的斜生柵藻，通過顯微鏡鏡檢得出藻細胞密度，選擇細胞密度范圍在(1-2)×10⁶ind/·ml^-1的對數(shù)期斜生柵藻藻液，用于敵草凈生物毒性的測定。

所述的銨鹽溶液的濃度為0.1-0.2mol/L。

所述銨鹽選自硫酸銨、氯化銨、硝酸銨、磷酸銨鹽中的一種或兩種以上組合。

恒溫光照培養(yǎng)箱的培養(yǎng)條件是：光照度為2000lx，溫度為25±2℃，濕度為75％RH，光暗周期為12h：12h，靜置培養(yǎng)，每日搖瓶2-3次，同時更換錐形瓶的位置。