[發明專利]一種LC?MS/MS測定大鼠血漿中Ly?7u濃度的方法

在審

• 申請號: 201611255758.5
• 申請日: 2016-12-30
• 公開（公告）號: CN106841420A
• 公開（公告）日: 2017-06-13
• 發明（設計）人: 趙真真;姜福林;鐘國平;魯桂;黃民
• 申請（專利權）人: 廣州中大南沙科技創新產業園有限公司;中山大學
• 主分類號: G01N30/02
• 分類號: G01N30/02;G01N30/06
• 代理公司: 廣州粵高專利商標代理有限公司44102
• 代理人: 陳衛

1.一種LC-MS/MS測定大鼠血漿中Ly-7u濃度的方法，其特征在于，包括如下步驟：

S1. 配制標準工作液：精密稱取Ly-7u和內標Ly-7z粉末，分別用甲醇水溶液溶解，并稀釋成標準工作液；

S2. 建立標準曲線：精密量取大鼠空白血漿，加入一系列Ly-7u標準工作液，加入內標Ly-7z標準工作液，采用液液萃取提取方法前處理，后利用LC-MS/MS進行分析，得到各樣本色譜圖，以待測物與內標峰面積比為橫坐標，以待測物濃度為縱坐標建立標準曲線；

S3. 待測樣本血漿處理：精密量取給藥Ly-7u后大鼠血漿，加入內標，采用液液萃取提取方法前處理；

S4. 利用LC-MS/MS進行分析，得到各樣品的色譜圖，利用標準曲線計算出樣本血漿的濃度。

2.根據權利要求1所述的方法，其特征在于，步驟S1所述甲醇水溶液的體積比組成為甲醇：水=90：10。

3.根據權利要求1所述的方法，其特征在于，步驟S1所述用甲醇水溶液溶解后還需經過超聲5～15min進行溶解。

4.根據權利要求1所述的方法，其特征在于，步驟S2中加入Ly-7u標準工作液和加入內標Ly-7z標準工作液后，都需要輕渦混勻。

5.根據權利要求1所述的方法，其特征在于，步驟S2所述液液萃取選用乙酸乙酯。

6. 根據權利要求1所述的方法，其特征在于，步驟S2或S3所述液液萃取提取方法前處理為：加入乙酸乙酯，渦旋2 min，靜置10 min，15000 rpm離心10 min，吸取上清液，室溫下真空揮干，加入復溶液溶解，渦旋1.5 min，15000 rpm離心5 min；所述復溶液的體積比組成為：甲醇：0.1%甲酸水=9：1，其中還含有5mM醋酸銨。

7. 根據權利要求1所述的方法，其特征在于，步驟S2或S4所述LC-MS/MS的色譜條件設定如下：流動相為甲醇(A)/水（含0.1%甲酸和5 mM的乙酸銨）(B)；梯度洗脫(0–1 min, 5%–90% A; 1–4 min, 90%–90% A; 4–4.1 min, 90%–5% A; 4.1–5 min, 90%–90% A)；

流速0.3 mL·min^-1；進樣量2 μL；柱溫25 ℃；MRM模式：Ly-7u：m/z 410→m/z 353；Ly-7z：m/z 457→m/z 368。

8. 根據權利要求1所述的方法，其特征在于，步驟S2或S4所述LC-MS/MS中Ly-7u的定量子離子為353m/z，內標定量子離子為368 m/z。

9.根據權利要求1所述的方法，其特征在于，所有用到的水均為超純水，所有有機試劑均為HPLC級。

10.根據權利要求1所述的方法，其特征在于，所述LC-MS/MS為UHPLC-MS/MS。