[發明專利]一種LC?MS/MS法檢測血漿中沙利度胺的方法在審

申請號：	201611255733.5	申請日：	2016-12-30
公開（公告）號：	CN106596824A	公開（公告）日：	2017-04-26
發明（設計）人：	姜福林;鐘國平;高翔;黃民	申請（專利權）人：	廣州中大南沙科技創新產業園有限公司;中山大學
主分類號：	G01N30/88	分類號：	G01N30/88;G01N30/06
代理公司：	廣州粵高專利商標代理有限公司44102	代理人：	陳衛
地址：	511458 廣東省廣州市南沙***	國省代碼：	廣東;44
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摘要：
搜索關鍵詞：	一種 lc ms 檢測血漿中沙利度胺方法
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【說明書】：

技術領域

本發明屬于藥物動力學分析技術領域。更具體地，涉及一種利用液相質譜聯用技術進行的檢測血漿中沙利度胺的方法，可用于該藥治療藥物濃度監測。

背景技術

沙利度胺（Thalidomide, THD），商品名為反應停，二十世紀50年代由德國制藥商格蘭泰公司推出并廣泛作為鎮靜劑及預防妊娠性嘔吐的藥物使用，后因沙利度胺導致新生兒先天四肢殘缺即“反應停事件”而被撤出市場。之后發現沙利度胺具有抑制血管生成，抑制腫瘤壞死因子及免疫抑制等作用。目前臨床用于治療麻風結節性紅斑、多發性骨髓瘤、類風濕性關節炎、風濕性疾病和難治性潰瘍性結腸炎等。

而沙利度胺在臨床使用可能會引起周圍性神經炎、頭暈、頭痛和便秘等不良反應。其臨床療效、不良反應與沙利度胺的劑量關系不明顯，顯著影響沙利度胺的精準用藥，因此有必要檢測藥物的血液濃度，為沙利度胺的臨床合理用藥提供關鍵依據。

目前，沙利度胺的檢測方法主要有高效液相色譜法和反相高效液相色譜法，前者靈敏度低，檢測時間長，而后者目前文獻報道的檢測方法仍不能完全滿足臨床測定需求。

發明內容

本發明要解決的技術問題是克服上述現有技術的缺陷和技術不足，建立一種快速、靈敏度高、準確度和精密度高的液相色譜質譜聯用（LC-MS/MS）檢測血漿中沙利度胺濃度的方法，滿足臨床應用沙利度胺藥物濃度監測的需要和目的。

本發明的目的是提供一種LC-MS/MS法檢測血漿中沙利度胺的方法。

本發明上述目的通過以下技術方案實現：

一種LC-MS/MS法檢測血漿中沙利度胺的方法，包括如下步驟：精密量取空白血漿，加入一系列沙利度胺標準品標準工作液，加入檸檬酸鈉緩沖液和內標傘形花內酯標準品標準工作液，采用液液萃取方法前處理后，利用LC-MS/MS進行分析，得到各樣本色譜圖，以待測物與內標峰面積比為橫坐標，以待測物濃度為縱坐標建立標準曲線；然后精密量待測血漿，加入等體積檸檬酸鈉緩沖液，再加入內標傘形花內酯標準工作液，采用液液萃取方法前處理后，進行LC-MS/MS分析，得到各樣品的色譜圖，利用標準曲線計算出樣本血漿的濃度。

具體優選地，所述LC-MS/MS法檢測血漿中沙利度胺的方法，包括如下步驟：

S1.標準工作液配制

精密稱取沙利度胺和內標傘形花內酯粉末，分別用溶解液溶解并稀釋成標準工作液；所述溶解液為甲醇、乙腈和甲酸的混合溶液；

S2.標準曲線建立

精密量取空白血漿，加入一系列沙利度胺標準工作液，加入檸檬酸鈉緩沖液和內標傘形花內酯標準工作液，采用液液萃取方法前處理，后利用LC-MS/MS進行分析，得到各樣本色譜圖，以待測物與內標峰面積比為橫坐標，以待測物濃度為縱坐標建立標準曲線；

S3.待測樣品檢測

S31.待測樣本血漿前處理：精密量待測血漿，加入等體積檸檬酸鈉緩沖液，再加入內標傘形花內酯標準工作液（適量，血漿樣品體積的十分之一），采用液液萃取方法前處理；

S32.利用LC-MS/MS進行分析，得到各樣品的色譜圖，利用標準曲線計算出樣本血漿的濃度。

其中，優選地，步驟S1所述溶解液中甲醇、乙腈和甲酸的體積比為45～55：44～54：1。

更優選地，步驟S1所述溶解液中甲醇、乙腈和甲酸的體積比為50：49：1。

更優選地，步驟S1中沙利度胺的標準工作液的配制方法具體為：精密稱取沙利度胺標準品，用DMSO溶解定容為1000μg /ml 的標準儲備液，再用體積比為50：49：1的甲醇：乙腈：甲酸混合溶液梯度稀釋，配制成一系列濃度的標準工作液。

所述一系列濃度的標準工作液的濃度為20、50、250、1000、2500、5000、10000、20000 ng /ml。