[發明專利]一種用于黃花磯松組織培養的培養基

在審

• 申請號: 201611252779.1
• 申請日: 2016-12-30
• 公開（公告）號: CN106718921A
• 公開（公告）日: 2017-05-31
• 發明（設計）人: 馬懷林;張永清;劉思泱;崔海鵬;智磊;白俊梅;云娜;李晶晶;王召明;高秀梅;田志來;李德奎;徐沁貞;楊陽
• 申請（專利權）人: 內蒙古蒙草生態環境（集團）股份有限公司
• 主分類號: A01H4/00
• 分類號: A01H4/00
• 代理公司: 暫無信息
• 代理人: 暫無信息

技術領域

本發明屬于植物生物技術領域，涉及組織培養基，具體涉及一種用于黃花磯松組織培養的培養基

背景技術

黃花磯松(Limoniumau-reum)又稱金色補血草、黃花補血草，是多年生草本。黃花磯松屬于蘭雪科補血草屬植物，它是干旱荒漠地區為數不多的野生花卉之一，花色艷麗，開花延續時期較長。根為直根系，粗大，全株平滑，株高20～50cm，粗放管理、極耐干旱、花期長，是豐富北方城市綠化建設中地被植物品種的重要種質資源，而且又是防風固沙的優良植物。黃花磯松極具抗干旱高溫、耐鹽堿和耐貧瘠的特點，在敦煌的沙質戈壁灘能忍受降水量50mm，地表溫度55℃的干旱高溫環境；在北方干旱地區不需澆水，在氣溫-36℃以內可安全越冬；土壤PH9以下、含鹽量4‰以內可正常生長開花。其藥用價值具有止痛、消炎、補血之功效，在國內已開展相關研究。該物種不僅有良好的經濟效益，而且在保護生態環境方面也具有很好的生態效益，其開發利用前景廣泛。

近年來，關于黃花磯松的的組織培養已有文獻進行了報道，但文獻報道的黃花磯松組織培養的外植體多選擇種子，子葉或者莖段，培養基多采用的都是改良的MS培養基，這種組織培養方法極易引起褐化現象，并且不易生根。

發明內容

本發明的目的在于克服現有技術的不足，提供了一種用于黃花磯松組織培養的培養基，包括初代誘導基、繼代增殖基、生根培養基，初代誘導基配方為B5+KT 0.2-0.8mg/L+NAA 0.05-0.1mg/L+2，4-D 0.02-0.08mg/L；繼代增殖培養基配方為B5+KT 0.5-0.8mg/L+NAA 0.05-0.1mg/L；生根培養基配方為B5+IBA 0.1mg/L，在各個培養階段均附加食用白砂糖20-40g/L，卡拉膠3-5g/L。初代誘導基配方優選B5+KT 0.5mg/L+NAA 0.1mg/L+2，4-D 0.05mg/L；繼代增殖培養基配方優選為B5+KT 0.5mg/L+NAA 0.1mg/L。

本發明的培養基在使用過程中有如下步驟

(1)外植體的選擇與滅菌：取黃花磯松花序消毒滅菌，用自來水沖洗30-40min，吸水紙吸去水分后在70-75％的酒精中沖洗1-2min，再用0.1％的升汞溶液處理8-10min，無菌水淋洗6-7次，用已滅菌的濾紙吸干，黃花磯松的花序為2-3天后將要開放的花蕾；

(2)外植體誘導：將滅菌處理好的花序接入改良的B5培養基上，即在B5培養基基礎上添加植物激素，其濃度分別為：2，4-D 0.02-0.08mg/L；KT 0.2-0.8mg/L；NAA 0.05-0.1mg/L的誘導培養基上。附加食用白砂糖20-40g/L，卡拉膠3-5g/L。在溫度為25±2℃，光照強度1500-2000lx，光照時間12-16h/d的誘導條件下誘導15-20天誘導出愈傷；

(3)繼代增殖培養：將步驟(2)誘導出的黃花磯松愈傷取出，接種于改良的B5繼代增殖培養基，其中植物激素濃度為：KT 0.5-0.8mg/L；NAA 0.05-0.1mg/L，附加食用白砂糖20-40g/L，卡拉膠3-5g/L。在溫度為25±2℃，光照強度1500-2000lx，光照時間12-16h/d的條件下增殖培養30-40天，增殖出黃花磯松不定芽；

(4)生根培養：將步驟(3)增殖培養出的黃花磯松不定芽轉入配方為B5+IBA0.1mg/L生根培養基中，附加食用白砂糖20-40g/L，卡拉膠3-5g/L。在溫度為25±2℃，光照強度1500-2000lx，光照時間12-16h/d的條件下生根培養5-7天獲得組培苗。

本發明的技術方案中

1)初代誘導培養基為B5培養基基礎上添加2，4-D 0.02-0.08mg/L，優選0.05mg/L；KT 0.2-0.8mg/L，優選0.5mg/L；NAA 0.05-0.1mg/L，優選0.1mg/L。2，4-D可誘導愈傷的分化，側芽的萌發與生長，但過量的2，4-D有抑制芽形成的副作用，該誘導培養基不僅誘導率高，而且每個外植體新增芽數多，其誘導率最高可達84.8％。