[發明專利]一種兔支氣管敗血波氏桿菌亞單位疫苗

有效

• 申請號: 201611251490.8
• 申請日: 2016-12-30
• 公開（公告）號: CN106620685B
• 公開（公告）日: 2020-07-03
• 發明（設計）人: 張恒;郭莉莉;張會;范根成;杜元釗
• 申請（專利權）人: 青島易邦生物工程有限公司
• 主分類號: A61K39/02
• 分類號: A61K39/02;A61K39/39;A61P31/04;A61P11/02;A61P11/00
• 代理公司: 北京科億知識產權代理事務所(普通合伙) 11350
• 代理人: 湯東鳳

本發明提供一種兔支氣管敗血波氏桿菌亞單位疫苗，具體涉及分離培養及Bb基因特異性引物PCR擴增和測序鑒定一種兔支氣管敗血波氏桿菌(QDBb01株，保藏號為CCTCC M 2016607)，通過對該兔支氣管敗血波氏桿菌外膜蛋白(OMP)的提取及純化出蛋白分子量＞40kDa的抗原蛋白，然后采用Bradford蛋白含量測定法測出蛋白濃度并稀釋至150ug/ml，再與氫氧化鋁膠佐劑按照體積比1:4乳化制備出亞單位疫苗(成品相當于30ug/ml)，按照1ml/只劑量皮下注射免疫體重1.5kg左右的家兔，免后14日，用兔支氣管敗血波氏桿菌QDBb01株(LD₅₀為4.8×10⁵CFU)按照100LD₅₀進行耳靜脈注射攻毒，攻毒后觀察7日，統計家兔的攻毒保護率為10/10。

技術領域

本發明屬于獸用生物制品技術領域，具體涉及一種兔支氣管敗血波氏桿菌亞單位疫苗。

背景技術

兔支氣管敗血波氏桿菌病在秋冬季節和早春多發。主要通過空氣傳播，經呼吸道而感染。幼兔發病率高，并且有死亡病例。成年兔發病較少。此菌在群養兔污染為64.4％，散養兔為20％。在自然條件下，多種哺乳動物上呼吸道中都有本菌寄生，常引起慢性呼吸道病的相互感染。尤其在天氣突變，兔的抵抗力下降，兔舍衛生不好，空氣污濁等情況下，均可引起本病發生。本病的潛伏期7～10d。成年兔表現鼻炎和支氣管炎。有多量的漿液性、黏液性鼻液流出。鼻炎長期不愈，鼻腔流出黏液性或膿性分泌物，打噴嚏，呼吸困難，不食，消瘦等。仔兔多呈急性經過，初期剛見鼻炎病狀后，即表現呼吸困難，迅速死亡，病程2～3d。本病的主要病變為鼻炎、化膿性鼻氣管炎、化膿性支氣管肺炎，個別的出現敗血病變化。鼻腔、氣管黏膜充血、水腫。鼻腔內有漿液性、黏液性或黏液膿性分泌物。在肺門支氣管周圍到肺的邊緣見有支氣管肺炎病灶。病變多見于心葉、尖葉，嚴重的病例，波及全肺葉。病變部隆起、堅硬，呈暗紅色，褐色，進而為灰黃色。有些病例肺上有大小不等的膿瘡。嚴重的占肺部的90％以上。有的肝臟表面有黃豆至蠶豆大的膿瘡。膿瘡破后可見黏稠的奶油狀乳白色的膿汁。還見有心包炎、胸膜炎、胸腔積膿及肌肉膿腫等。

兔支氣管敗血波氏桿菌病主要采用生物安全措施和疫苗預防接種。其中生物安全措施主要包括：加強飼養管理，改善飼養環境，做好防疫工作；兔場最好堅持自繁自養；對新引進的兔，必須隔離觀察1個月以上，經細菌學與血清學檢查為陰性者方可入群。本病常與巴氏桿菌混合感染，兔群一旦發病，必須查明原因，消除外界刺激因素，隔離感染兔，以控制病原傳播。兔支氣管敗血波氏桿菌病較難治愈，需要加強規模化兔場的免疫，目前主要用分離到的支氣管敗血波氏桿菌制成滅活菌苗，進行預防接種，每只兔皮下注射1mL，每年2次；也有用兔巴氏桿菌—波氏桿菌二聯苗或巴氏桿菌—波氏桿菌—兔病毒性出血癥三聯苗預防接種(杜雅楠等,2006；黃艷艷等,2006)。但兔支氣管敗血波氏桿菌滅活疫苗容易出現細菌毒素殘留問題，常導致免疫兔發病，因此，目前迫切需要一種能夠防控該病的安全性、效力好的疫苗，從而彌補現有技術的不足。

發明內容

本發明的目的是提供一種兔支氣管敗血波氏桿菌亞單位疫苗，從而彌補現有技術的不足。

本發明首先提供一種兔支氣管敗血波氏桿菌，為兔支氣管敗血波氏桿菌QDBb01株(Rabbit Bordetella bronchiseptica QDBb01)，于2016年11月01日保藏在中國武漢的中國典型培養物保藏中心，保藏編號為CCTCC NO:M 2016607。

本發明所篩選的兔支氣管敗血波氏桿菌用于制備疫苗；

本發明再一個方面提供一種兔支氣管敗血波氏桿菌亞單位疫苗，其中抗原為從上述的兔支氣管敗血波氏桿菌中提取的，具有免疫原性的蛋白；