[發明專利]一種利用Genomic-SSR和EST-SSR兩類標記鑒評蝴蝶蘭遺傳多樣性的方法

有效

• 申請號: 201611248966.2
• 申請日: 2016-12-29
• 公開（公告）號: CN107058487B
• 公開（公告）日: 2019-01-15
• 發明（設計）人: 李佐;肖文芳;陳和明;呂復兵
• 申請（專利權）人: 廣東省農業科學院環境園藝研究所
• 主分類號: C12Q1/6895
• 分類號: C12Q1/6895;C12N15/11
• 代理公司: 廣州粵高專利商標代理有限公司 44102
• 代理人: 單香杰

1.一種鑒評蝴蝶蘭遺傳多樣性的引物組合物，其特征在于，所述引物組合物由2對Genomic-SSR引物和8對EST-SSR引物組成，2對Genomic-SSR引物分別為G-1和G-2，G-1的序列如SEQ ID NO：1～2所示，G-2的序列如SEQ ID NO：3～4所示；8對EST-SSR引物分別為E-1、E-2、E-3、E-4、E-5、E-6、E-7、E-8，E-1的序列如SEQ ID NO：5～6所示，E-2的序列如SEQ IDNO：7～8所示，E-3的序列如SEQ ID NO：9～10所示，E-4的序列如SEQ ID NO：11～12所示，E-5的序列如SEQ ID NO：13～14所示，E-6的序列如SEQ ID NO：15～16所示，E-7的序列如SEQID NO：17～18所示，E-8的序列如SEQ ID NO：19～20所示。

2.權利要求1所述的引物組合物在鑒評蝴蝶蘭遺傳多樣性中的應用。

3.一種鑒評蝴蝶蘭遺傳多樣性的方法，其特征在于，包括如下步驟：

(1)提取待分析蝴蝶蘭的總DNA；

(2)對權利要求1所述的引物組合物進行熒光標記后，以步驟(1)的DNA為模板分別進行PCR反應；

(3)記錄每對引物的擴增峰型，對獲得的數據進行分析處理，評價蝴蝶蘭種質的遺傳多樣性。

4.根據權利要求3所述的方法，其特征在于，提取待分析蝴蝶蘭的總DNA時，以蝴蝶蘭的嫩根作為提取樣本。

5.根據權利要求3所述的方法，其特征在于，所述PCR的擴增體系為DNA模板1μl、5μM的上下游引物1μl、5U/μl 的Taq酶0.1μl、緩沖液6μl、加水補充至15μl。

6.根據權利要求3所述的方法，其特征在于，所述PCR的擴增程序為95℃，5min；94℃，30sec；58℃，35sec；35個循環；72℃，35sec，60℃，30min；15℃。