[發明專利]HIV重組抗原、表達基因、表達載體以及HIV檢測試劑盒

有效

• 申請號: 201611248274.8
• 申請日: 2016-12-29
• 公開（公告）號: CN106632691B
• 公開（公告）日: 2020-03-31
• 發明（設計）人: 李瑞凈;孟媛;于秀玲;王益瓊;林育佳;孫康成
• 申請（專利權）人: 菲鵬生物股份有限公司
• 主分類號: C07K19/00
• 分類號: C07K19/00;C12N15/62;C12N15/63;G01N33/577;G01N33/569;C12N5/20;C12R1/91
• 代理公司: 廣州華進聯合專利商標代理有限公司 44224
• 代理人: 徐春祺

本發明公開了一種能夠用于檢測HIV?O亞型的HIV重組抗原，表達該HIV重組抗原的表達基因和表達載體，以及含有該HIV重組抗原的HIV檢測試劑盒。HIV重組抗原，包括依次連接的HIV?1型段、HIV?2型段和HIV?O亞型段；所述HIV?O亞型段為由SEQ ID No.3所示的核苷酸序列編碼得到的多肽。這種HIV重組抗原中含有HIV?O片段，從而可以用于檢測HIV?O亞型。在具體的試驗中，包括這種HIV重組抗原的HIV檢測試劑盒在檢測HIV?O亞型時表現出較高的特異性和靈敏性。

技術領域

本發明涉及生物技術領域，特別是涉及一種HIV重組抗原、表達基因、表達載體以及HIV檢測試劑盒。

背景技術

自1982年命名獲得性免疫缺陷病綜合癥(AIDS)以來，HIV(Humanimmunodeficiency virus)的感染在全球廣泛流行，嚴重威脅著人們的生命健康，因此，必須對HIV感染進行監控。為了盡早、盡快發現感染者《國務院關于進一步加強艾滋病防治工作的通知》國發【2010】48號明確提出要進一步加強監測檢測網絡建設依托現有醫療衛生資源配備必要的設備和人員擴大檢測服務范圍，推廣使用快速簡便的檢測方法提高檢測可及性。有鑒于此，研發簡便、準確、快速的檢測產品，及早檢測艾滋病病毒感染，杜絕艾滋病的傳播成為預防控制艾滋病的首要手段。

目前國內外用于檢測艾滋病的方法有酶聯免疫吸附實驗、膠體金檢測技術、免疫印跡檢測技術、核酸檢測技術和生物芯片檢測技術。

酶聯免疫吸附實驗(enzyme linked immunosorbent assay,ELISA)：是免疫測定技術中應用最廣的技術。其基本方法是將已知的抗原吸附在固相載體(聚苯乙烯微量反應板)表面，用洗滌法將液相中的游離成分洗除，加入標本，洗滌，加入酶標記抗原，使抗原抗體反應在固相表面進行，用于測定HIV特異抗體。

膠體金檢測技術(Colloidal-Gold Test)是以膠體金作為示蹤標志物應用于抗原抗體的一種新型的免疫標記技術，能夠用于快篩查，但有一定的缺陷如靈敏度不夠等等。

免疫印跡檢測技術(Immunoblotting)又稱蛋白質印跡(Western blotting)，是根據抗原抗體的特異性結合檢測復雜樣品中的某種蛋白的方法。該方法是在凝膠電泳和固相免疫測定技術基礎上發展起來的一種新的免疫技術。由于免疫印跡具有SDS-PAGE的高分辨力和固相免疫測定的高特異性和敏感性，現已成為蛋白分析的一種常規技術，但比較耗時。

核酸檢測技術(Nucleic Acid Test，NAT)是利用分子生物學的理論和技術，它的目標分子是DNA或RNA，通過直接探查病毒核酸的存在與否，從而對人體狀態與疾病做出診斷的方法，但其對標本及核酸擴增酶的靈敏度及特異性要求較高，目前國內外還沒有大量普及。

生物芯片檢測技術(Bio-chip Test)是通過縮微技術，根據分子間特異性地相互作用的原理，將生命科學領域中不連續的分析過程集成于硅芯片或玻璃芯片表面的微型生物化學分析系統，以實現對細胞、蛋白質、基因及其它生物組分的準確、快速、大信息量的檢測，但價格昂貴不適合普查。

每種檢測技術各有優缺，ELISA檢測因為其操作簡單、靈敏度和特異性好、成本低廉、檢測時間短等特點，已經被各大血站、血液制品廠、醫院等醫療結構所普遍采用，是應用最廣的一項檢測技術。

按照檢測原理，ELISA可以分為間接法、夾心法、捕獲法、競爭抑制法等。根據試劑所用抗原的來源以及檢測試劑的類型，可將HIV酶聯免疫檢測試劑的發展分為4個階段。