[發明專利]一種用于改善記憶力的混合物及其制備方法和應用

有效

• 申請號: 201611247898.8
• 申請日: 2016-12-29
• 公開（公告）號: CN106581062B
• 公開（公告）日: 2020-09-18
• 發明（設計）人: 栗琳;崔文宏;宣春玲;張麗麗;孔毅榮;郝敬雨;石浩威
• 申請（專利權）人: 江蘇豪思睦可生物科技有限公司
• 主分類號: A61K35/16
• 分類號: A61K35/16;A61K38/17;A61K38/36;A61P25/28
• 代理公司: 北京五洲洋和知識產權代理事務所(普通合伙) 11387
• 代理人: 劉春成;榮紅穎

1.一種用于改善記憶力的混合物，其特征在于：來源于血漿，包括多種蛋白質和多種小分子，所述混合物的SDS-PAGE變性膠電泳具有6條肉眼清晰可見的條帶，所述條帶的分子量為：25kD、55kD、68kD、73kD、100kD、160kD；

所述混合物的制備方法依次包括以下步驟：血漿收集、低溫過濾、低溫超濾、冷乙醇沉淀、SD滅活、離心分離、陰離子交換、透析、濃縮，其中：

在所述低溫過濾步驟中，在壓力條件下將所述血漿進行過濾，得到濾液；所述過濾采用的濾膜的孔徑為0.22微米或0.45微米；

在所述低溫超濾步驟中，將所述濾液通過施加壓力進行膜包超濾，得到截留在膜內的液體作為低溫超濾產物；所述膜包的截留分子量為3kD-10kD，所述超濾使用的緩沖液是濃度為1mM、pH值為8.0的Tris鹽酸緩沖液；

在所述冷乙醇沉淀步驟中，將所述低溫超濾產物與冷乙醇混合后靜置，得到冷乙醇沉淀產物；所述冷乙醇和所述低溫超濾產物的體積比為1：(1-5)；

在所述SD滅活步驟中，將所述冷乙醇沉淀產物用SD滅活劑重新懸浮后靜置，得到滅活產物；其中，所述靜置的溫度為4～40℃，時間為6～24小時；所述SD滅活劑含有0.3～2％的N-丁基三磷酸鹽、0.5～2％的吐溫；

在所述離心分離步驟中，將所述滅活產物離心后保留上清液，得到離心分離產物；其中，所述離心的轉速為2000-5000g，離心的時間為10-30分鐘；

在所述陰離子交換步驟中，將所述離心分離產物加入陰離子交換柱中采用洗脫緩沖液進行梯度洗脫，收集洗脫液得到陰離子交換產物；其中，所述洗脫緩沖液為含有20-500mM氯化鈉的Tris-鹽酸緩沖液，所述Tris-鹽酸緩沖液的濃度為200mM、pH值為8.0；開始收集洗脫液時的洗脫體積為15-35ml，停止收集洗脫液時的洗脫體積為40-85ml；

在所述透析步驟中，將所述陰離子交換產物進行透析，收集透析容器中的產物得到透析產物；其中，所述透析使用的透析緩沖液為1mM、pH值為8的Tris-鹽酸緩沖液；所述透析的時間為20-72h；所述透析的體積比是1:(100-10000)；

在所述濃縮步驟中，將所述透析產物進行濃縮，得到濃縮產物，即為所述混合物；其中，所述透析產物的體積是所述濃縮產物的體積的不小于10倍，所述濃縮時采用的濃濃縮管或濃縮杯允許1.5-2.5KD的物質通過。

2.根據權利要求1所述的用于改善記憶力的混合物，其特征在于：通過蛋白質譜分析，所述混合物中至少含有如下91種蛋白：

3.根據權利要求2所述的用于改善記憶力的混合物，其特征在于：所述多種小分子至少包括與所述91種蛋白中任何一種蛋白結合的小分子。

4.根據權利要求1所述的用于改善記憶力的混合物，其特征在于：所述血漿來源于哺乳動物。

5.根據權利要求4所述的用于改善記憶力的混合物，其特征在于：所述血漿來源于人類。

6.根據權利要求1所述的用于改善記憶力的混合物，其特征在于：在所述血漿收集步驟中，利用抗凝管收集血液，再通過離心收集上清液，得到血漿；所述離心轉速為500-1500g，離心時間為10-30分鐘，離心溫度為0-4℃。

7.根據權利要求1所述的用于改善記憶力的混合物，其特征在于：在所述低溫過濾步驟中，

所述過濾的溫度為0-4℃，壓力為1-20MPa。

8.根據權利要求1所述的用于改善記憶力的混合物，其特征在于：在所述低溫超濾步驟中，所述超濾的溫度為0-10℃，壓力為1-20MPa。

9.根據權利要求1所述的用于改善記憶力的混合物，其特征在于：在所述冷乙醇沉淀步驟中，所述冷乙醇的溫度為0℃至零下20℃；所述靜置溫度為0℃至零下10℃。