[發明專利]一種豌豆SSR指紋圖譜的構建方法

有效

• 申請號: 201611247537.3
• 申請日: 2016-12-29
• 公開（公告）號: CN106636417B
• 公開（公告）日: 2020-02-11
• 發明（設計）人: 宗緒曉;張紅巖;楊濤;劉榮
• 申請（專利權）人: 中國農業科學院作物科學研究所
• 主分類號: C12Q1/6895
• 分類號: C12Q1/6895;C12Q1/6858;C12N15/11
• 代理公司: 11002 北京路浩知識產權代理有限公司
• 代理人: 王文君

1.一種用于鑒別豌豆品系或其野生近緣種的分子標記組合，其特征在于，含有19個基因組SSR分子標記和12個EST-SSR分子標記，分別為SSR4825、SSR4696、SSR28304、SSR24036、B83、EST671、SSR27844、SSR25888、SSR24882、SSR23759、SSR21491、EST619、SSR24112、EST599、SSR22754、P14、SSR24731、SSR25334、EST876、SSR28967、SSR21399、SSR21405、P282、EST643、SSR25799、SSR25965、P291、P292、SSR22052、P344、EST617；

所述分子標記分別通過以下引物對擴增得到：SEQ ID NO.1-2、SEQ ID NO.3-4、SEQ IDNO.5-6、SEQ ID NO.7-8、SEQ ID NO.9-10、SEQ ID NO.11-12、SEQ ID NO.13-14、SEQ IDNO.15-16、SEQ ID NO.17-18、SEQ ID NO.19-20、SEQ ID NO.21-22、SEQ ID NO.23-24、SEQID NO.25-26、SEQ ID NO.27-28、SEQ ID NO.29-30、SEQ ID NO.31-32、SEQ ID NO.33-34、SEQ ID NO.35-36、SEQ ID NO.37-38、SEQ ID NO.39-40、SEQ ID NO.41-42、SEQ ID NO.43-44、SEQ ID NO.45-46、SEQ ID NO.47-48、SEQ ID NO.49-50、SEQ ID NO.51-52、SEQ IDNO.53-54、SEQ ID NO.55-56、SEQ ID NO.57-58、SEQ ID NO.59-60、SEQ ID NO.61-62所示的引物。

2.一種引物組合，其特征在于，含有以下31對特異性引物對，其核苷酸序列分別如SEQID NO.1-62所示。

3.含有權利要求2所述引物組合的試劑盒。

4.權利要求2所述的引物組合或權利要求3所述的試劑盒在鑒定豌豆品種中的應用。

5.權利要求2所述的引物組合或權利要求3所述的試劑盒在豌豆輔助育種中的應用。

6.一種豌豆SSR指紋圖譜的構建方法，其特征在于，以權利要求2所述的引物組合對不同豌豆品系或其野生近緣種的DNA進行PCR擴增，對PCR產物進行非變性聚丙烯酰胺凝膠電泳進行檢測或對PCR產物進行熒光毛細管電泳檢測：

純合位點的等位變異大小數據記錄為X/X，其中X為該位點等位變異的大??；

雜合位點的等位變異數據記錄為X/Y，其中X、Y為該位點上兩個不同的等位變異；

無效等位變異的大小記錄為0/0；

上述“/”前為小片段，“/”后為大片段；

通過對不同位點的數據整合，形成不同豌豆的SSR指紋圖譜。

7.如權利要求6所述的構建方法，其特征在于，PCR擴增方法為：

反應程序為：95℃預變性5min；95℃變性35s，54℃退火40s，72℃延伸45s，共35個循環；72℃延伸5min，10℃保溫5min；

10μL擴增體系為：2×Taq PCR Master Mix 5μL，2μM/μL的上、下游引物各1μL，DNA模板1.5μL，ddH₂O 2.5μL。