[發明專利]一種聚肽的快速檢測方法

有效

• 申請號: 201611247138.7
• 申請日: 2016-12-29
• 公開（公告）號: CN106841419B
• 公開（公告）日: 2019-08-13
• 發明（設計）人: 劉丹;李石平;余繼剛;宋瑞;陳雷;湯偉強;王淯;任磊;吳義香
• 申請（專利權）人: 合肥安德生制藥有限公司
• 主分類號: G01N30/02
• 分類號: G01N30/02;G01N30/74
• 代理公司: 合肥順超知識產權代理事務所(特殊普通合伙) 34120
• 代理人: 周發軍

1.一種聚肽的快速檢測方法，其特征在于，包括如下步驟：

(1)樣品溶液的配制：取發酵液或發酵菌體破碎液或純化中間過程溶液適量，過0.22μm濾膜；

(2)樣品的測定：采用高效液相離子交換色譜法，以10-30mM的Na₂HPO₄-NaH₂PO₄緩沖溶液或K₂HPO₄-KH₂PO₄緩沖溶液或Tris-HCl緩沖溶液作為洗脫液A，調pH至7.5-8.5，以洗脫液A為溶劑配制1-3M的NaCl溶液或KCl鹽溶液為洗脫液B；

所述離子交換色譜條件為：填料Q Sepharose^TM FF裝填于空管柱或使用預裝柱；柱溫：25℃；進樣量：10μL；流速：0.1-2mL/min；洗脫方式：0-10min，100％A等度洗脫；10-25min，洗脫液A:洗脫液B為90:10；25-45min，洗脫液A:洗脫液B為80:20；45-60min，洗脫液A:洗脫液B為70:30；60-80min，100％B等度洗脫，之后通過雙波長紫外檢測器檢測；

(3)含量分析；

其中，所述聚肽為鹽型陰離子聚肽，所述鹽型陰離子聚肽包括α-聚谷氨酸、γ-聚谷氨酸、聚天冬氨酸以及由谷氨酸和天冬氨酸所形成的聚肽的鹽。

2.根據權利要求1所述的聚肽的快速檢測方法，其特征在于，所述含量分析為根據標準曲線法進行聚肽的含量計算。

3.根據權利要求2所述的聚肽的快速檢測方法，其特征在于，所述標準曲線法為：稱取聚肽標準品，溶于洗脫液A中，配制成一定濃度的標準溶液，分別稀釋成一定濃度梯度的稀釋液，過0.22μm濾膜，分別進行檢測，以標準溶液的質量濃度為橫坐標，色譜峰面積為縱坐標，繪制標準曲線。

4.根據權利要求1所述的聚肽的快速檢測方法，其特征在于，所述的離子交換空管柱或預裝柱內徑為2-20mm，長度為20-100mm，總體積為1-25mL。

5.根據權利要求1所述的聚肽的快速檢測方法，其特征在于，所述的雙波長檢測，其中一個檢測通道波長設置為205-230nm，用于檢測不含苯環的蛋白類物質，另一個檢測通道波長設置為250-280nm，用于檢測核酸類和含苯環的蛋白類物質。

6.根據權利要求5所述的聚肽的快速檢測方法，其特征在于，所述不含苯環的蛋白類物質包括聚肽。